[發明專利]大豆脂肪氧化酶同功酶的單克隆抗體雜交瘤細胞株及其抗體和應用

有效

• 申請號: 201110219334.4
• 申請日: 2011-08-02
• 公開（公告）號: CN102363768A
• 公開（公告）日: 2012-02-29
• 發明（設計）人: 張孟臣;馬志民;蔣春志;邸銳
• 申請（專利權）人: 河北省農林科學院糧油作物研究所
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/40;G01N33/577;G01N33/573
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費碧華

技術領域

本發明涉及一種單克隆抗體雜交瘤細胞株及其單克隆抗體，特別涉及分別 分泌抗大豆脂肪氧化酶同功酶Lox1、Lox2和Lox3的單克隆抗體雜交瘤細胞株 及其單克隆抗體，細胞株保藏編號分別為：CGMCC?5121、CGMCC?5122及 CGMCC?5123，還涉及各自分泌的單克隆抗體在利用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法 (DAS-ELISA)檢測大豆脂肪氧化酶同功酶當中的應用，屬于生物檢測技術領 域。

背景技術

大豆中含有三種脂肪氧化酶(Lipoxygenase，簡稱Lox)同功酶即Lox1、 Lox2和Lox3，它們能專一催化具有cis，cis-1，4-戊二烯結構的多元不飽和脂肪酸 通過分子加氧，形成具有共軛雙鍵的氫過氧化衍生物，即醛、酮等具有揮發性 的異味物質，使大豆具有豆腥味，從而降低了豆制品的耐儲性、食用性和營養 價值。通常在大豆加工過程中人們通過加熱、微波照射、改變介質的pH值、有 機溶劑萃取和醛水解酶等方法消除豆腥味，但這些方法都會不同程度地降低豆 制品的營養價值，并且使得成本增高。培育脂肪氧化酶缺失品種可以從根本上 解決上述問題。但在脂肪氧化酶缺失材料的選育過程中，Lox在田間不存在指示 性狀，從種子外觀和農藝性狀上無法鑒別，并且田間脂肪氧化酶缺失材料選擇 工作量大，因此急需一種快速、簡便、成本低、一次可以同時檢測出三種脂肪 氧化酶的檢測方法。

目前脂肪氧化酶的常用的檢測方法是薄層等電聚焦電泳(IEF)檢測方法， 這種方法主要是通過酶染法和蛋白染色方法結合使Lox同功酶帶顯色，雖然能 同時檢測出三種脂肪氧化酶，但檢測中常常會因Lox的缺失而發生其它Lox等 電點正極漂移現象；另外該方法所需設備、試劑昂貴，操作要求嚴格，一般育 種、倉儲單位和加工質檢部門不便操作。

另外據日本Suzuki，Y等1992年報道(Prodution?and?use?of?monolional? antibodies?against?rice?embryo?lipoxygenase-3，Biosci?Biotech.Biochem.56： 678-679)：用單克隆抗體可以檢測水稻中的Lox3，這種方法雖然結果準確可靠， 但檢測過程中除需要做封閉外，還需要過夜包被酶標板，因此耗時，操作起來 不方便。

申請號00112539.7的專利公開了一種作物脂肪氧化酶同功酶的檢測方法， 該方法具有操作簡便、結果直觀等特點。但由于它是利用脂肪氧化酶的偶聯氧 化還原指示劑顯色反應的原理來進行測定的，所以它的靈敏度和特異性受到一 定的限制。

發明內容

本發明的目的在于避免上述方法的缺陷，建立能分別分泌抗大豆脂肪氧化 酶同功酶Lox1、Lox2、Lox3的特異性單克隆抗體的3個雜交瘤細胞株，利用這 些細胞株分泌的特異性單克隆抗體來組裝可以用于同時檢測大豆中三種脂肪氧 化酶同功酶的雙抗體夾心酶聯免疫吸附(DAS-ELISA)檢測試劑盒。該試劑盒 適用于對大豆中三種脂肪氧化酶的定性和定量測定。

本發明所解決的第一個技術問題是提供了一組抗大豆脂肪氧化酶同功酶的 單克隆抗體雜交瘤細胞株，其特征在于所述的單克隆抗體雜交瘤細胞株包括抗 大豆脂肪氧化酶Lox1的單克隆抗體雜交瘤細胞株，為小鼠的脾細胞與SP2/0細 胞經過細胞融合產生，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心， 其菌種保藏編號為：CGMCC?5121；及

抗大豆脂肪氧化酶Lox2的單克隆抗體雜交瘤細胞株，為小鼠的脾細胞與 SP2/0細胞經過細胞融合產生，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生 物中心，其菌種保藏編號為：CGMCC?5122；及

抗大豆脂肪氧化酶Lox3的單克隆抗體雜交瘤細胞株，為小鼠的脾細胞與 SP2/0細胞經過細胞融合產生，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生 物中心，其菌種保藏編號為：CGMCC?5123。

所述的抗大豆脂肪氧化酶Lox1、Lox2、Lox3的單克隆抗體雜交瘤細胞株的 建立方法如下：