[發(fā)明專利]大豆脂肪氧化酶同功酶的單克隆抗體雜交瘤細胞株及其抗體和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110219334.4
• 申請日: 2011-08-02
• 公開（公告）號: CN102363768A
• 公開（公告）日: 2012-02-29
• 發(fā)明（設計）人: 張孟臣;馬志民;蔣春志;邸銳
• 申請（專利權）人: 河北省農林科學院糧油作物研究所
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/40;G01N33/577;G01N33/573
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費碧華

1.一組抗大豆脂肪氧化酶同功酶的單克隆抗體雜交瘤細胞株，其特征在于 所述的單克隆抗體雜交瘤細胞株包括抗大豆脂肪氧化酶Lox1的單克隆抗體雜交 瘤細胞株，為小鼠的脾細胞與SP2/0細胞經(jīng)過細胞融合產生，保藏在中國微生 物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其菌種保藏編號為：CGMCC?5121；及

抗大豆脂肪氧化酶Lox2的單克隆抗體雜交瘤細胞株，為小鼠的脾細胞與 SP2/0細胞經(jīng)過細胞融合產生，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生 物中心，其菌種保藏編號為：CGMCC?5122；及

抗大豆脂肪氧化酶Lox3的單克隆抗體雜交瘤細胞株，為小鼠的脾細胞與 SP2/0細胞經(jīng)過細胞融合產生，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生 物中心，其菌種保藏編號為：CGMCC?5123。

2.由權利要求1所述的單克隆抗體雜交瘤細胞株分泌的單克隆抗體，其特 征在于所述的單克隆抗體包括由抗大豆脂肪氧化酶Lox1的單克隆抗體雜交瘤細 胞株分泌的特異性抗Lox1的單克隆抗體；及

由抗大豆脂肪氧化酶Lox2的單克隆抗體雜交瘤細胞株分泌的特異性抗 Lox2的單克隆抗體；及

由抗大豆脂肪氧化酶Lox3的單克隆抗體雜交瘤細胞株分泌的特異性抗 Lox3的單克隆抗體。

3.權利要求2所述的單克隆抗體在檢測大豆脂肪氧化酶同功酶中的應用。

4.權利要求2所述的單克隆抗體在制備檢測大豆脂肪氧化酶同功酶試劑盒 中的應用。

5.一種檢測大豆脂肪氧化酶同功酶的方法，其特征在于包含以下步驟：

A、將權利要求2所述的各單克隆抗體分離純化；

B、采用辣根酶標記純化后的單克隆抗體，分別獲得辣根酶標記的抗大豆 Lox1、Lox2和Lox3的單克隆抗體，作為檢測抗體，酶標后分別命名為L-1，L-2， L-3；

C、利用大豆脂肪氧化酶同功酶Lox1、Lox2、Lox3的多克隆抗體作為固相 抗體包被酶標板，步驟B中得到的L-1，L-2，L-3作為檢測抗體，利用抗原抗 體的結合反應，通過顯色與否及深淺來檢測大豆種子當中Lox1、Lox2、Lox3 這3種脂肪氧化酶的缺失類型和含量。

6.一種檢測大豆脂肪氧化酶同功酶的試劑盒，包括盒體、設在盒體內的酶 標板和存放在盒體內的試劑，其特征在于盒內存放的瓶裝檢測試劑由以下試劑 組成：pH為8.0的Tris-CaCl₂緩沖液；陽性對照試劑；陰性對照試劑；Tween20 -NaCl溶液緩沖液；權利要求2所述的抗體分別經(jīng)辣根酶標記后得到的抗大豆 脂肪氧化酶同功酶Lox1、Lox2和Lox3單克隆抗體試劑；含有20％的3，3’，5，5’- 四甲基聯(lián)苯胺的無水乙醇底物液；pH為5.0磷酸鹽檸檬酸緩沖液底物液；2M H₂SO₄終止液；用雙蒸水將sigma公司Soybean?Lox?type1-B產品稀釋成80萬活 力單位/ml得到的標準液。

7.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于所述的陽性對照為從普通大豆 種子中提取的總蛋白。

8.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于所述的陰性對照為從脂肪氧化 酶全缺失大豆中提取的總蛋白。