[發(fā)明專利]一種羧甲基化黑木耳多糖、粗多糖及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110219047.3
• 申請(qǐng)日: 2011-08-02
• 公開（公告）號(hào): CN102321186A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 仰榴青;趙婷;吳向陽(yáng);魏紅;張敏;周葉;張冰濤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇大學(xué)
• 主分類號(hào): C08B37/00
• 分類號(hào): C08B37/00;A23L1/09
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種羧甲基化黑木耳多糖及其制備方法和它的應(yīng)用，屬于多糖改性技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

黑木耳（Auricularia?auricular（L.ex?Hook）Underw）又名木蛾、樹雞、云耳、耳子等,屬真菌類擔(dān)子菌綱，銀耳目，木耳科，木耳屬，廣泛分布于北半球溫帶地區(qū)的東北亞，尤其是我國(guó)東北地區(qū)。黑木耳不僅味道鮮美，而且營(yíng)養(yǎng)豐富，經(jīng)全面營(yíng)養(yǎng)成分分析表明，黑木耳含有豐富的蛋白質(zhì)、多種氨基酸、纖維素、維生素及礦物質(zhì)等（吳憲瑞.黑木耳的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及其營(yíng)養(yǎng)成分.中國(guó)林副特產(chǎn)，1996，36（1）：21-22.），有著“素中之肉”、“素食之王”的美稱，是一種營(yíng)養(yǎng)價(jià)值極高的黑色滋補(bǔ)食品，得到世界廣泛的公認(rèn)（張潤(rùn)光，刁小琴，關(guān)海寧.黑木耳營(yíng)養(yǎng)保健功能及其產(chǎn)品開發(fā).保鮮與加工，2010，10（1）：54-56.）。傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為，黑木耳性味甘平，具有清肺潤(rùn)腸、滋陰補(bǔ)血、活血化瘀、明目養(yǎng)胃等功效，對(duì)崩漏、痔瘡、血痢、貧血及便秘等癥狀有效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，黑木耳的生物活性主要來自其多糖成分，黑木耳多糖作為“生物應(yīng)答效應(yīng)物”，具有抗凝血、抗腫瘤、抗炎癥等細(xì)胞保護(hù)作用，還具有降低血脂、血糖、血液粘度、膽固醇以及抗糖尿病、抗衰老、抗輻射等多種生物功能（黃賢剛，全永亮，管斌，胡勇.黑木耳多糖研究進(jìn)展.糧油食品科技，2010，18（1）：47-54.）。但研究發(fā)現(xiàn)，黑木耳中性多糖由于其溶解性差，極大的限制了其進(jìn)一步的研究和在食品、藥品開發(fā)中的應(yīng)用。?

分子修飾是通過化學(xué)、物理學(xué)及生物學(xué)等手段對(duì)化合物分子進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，以獲得不同結(jié)構(gòu)類型衍生物的方法。對(duì)多糖進(jìn)行分子修飾，有利于改變多糖的結(jié)構(gòu)，改善多糖的溶解性，增強(qiáng)天然多糖的生物活性或使多糖產(chǎn)生新的活性，還可降低多糖類藥物的毒副作用，從而有利于多糖類藥物的開發(fā)與應(yīng)用。多糖分子修飾的方法主要有硫酸化修飾、磷酸化修飾、乙?；揎?、烷基化修飾、磺酰化修飾、羧甲基化修飾等（張難，吳遠(yuǎn)根，莫莉萍，張永鳳，邱樹毅，王文平.多糖的分子修飾研究進(jìn)展.貴州科學(xué)，2008，26（3）：66-71.）。羧甲基化作為一種常用的修飾方法，已成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。2010年，吳廣楓，李平蘭等申請(qǐng)的專利“一種所佳話雙歧桿菌胞外多糖及其制備方法和應(yīng)用”（申請(qǐng)?zhí)枺?01001248295.6），將胞外多糖與氯乙酸在堿溶液中反應(yīng)得到羧甲基雙歧桿菌胞外多糖，并證明該多糖可以顯著提高小鼠脾細(xì)胞中IL-2、IFNγ細(xì)胞因子水平，免疫調(diào)節(jié)力顯著高于未改性的雙歧桿菌胞外多糖。2005年，郭祀遠(yuǎn)等申請(qǐng)的專利“羧甲基裂褶多糖制備方法及在化妝品和抗腫瘤藥物中應(yīng)用”（申請(qǐng)?zhí)枺?00510101678.X），發(fā)現(xiàn)羧甲基化多糖的溶解性得到顯著改善，并且保持良好的流變性能和抗腫瘤活性。本發(fā)明人對(duì)黑木耳多糖進(jìn)行羧甲基化，確定其結(jié)構(gòu)特征，比較研究了羧甲基化前后多糖的溶解性和抗氧化活性。有關(guān)黑木耳多糖羧甲基化衍生物的制備和抗氧化活性研究至今未見國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道，也未見相應(yīng)專利公開。

發(fā)明內(nèi)容

????為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)中的不足，本發(fā)明提供一種羧甲基化黑木耳多糖及其制備方法和應(yīng)用。

一、本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供一種羧甲基化黑木耳粗多糖和羧甲基化黑木耳多糖。

一種羧甲基化黑木耳粗多糖（CMAAP），其多糖得率為61.36%；羧甲基化取代度為0.857；溶解度為0.6?mg/mL。

一種羧甲基化黑木耳多糖（CMAAP22），該多糖分子量為3.4×10⁶?Da；單糖組成為：甘露糖(man)?:?葡萄糖(glu)?=?1.06?:?1；該多糖以β-(1→3)-D-?man為主鏈，glu以取代基的形式鍵和于甘露糖的O-2和O-6位，糖殘基的C-2,?C-4?和C-6位由–CH₂COOH部分取代；該多糖溶解度為26?mg/mL。

本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供上述羧甲基化黑木耳粗多糖和羧甲基化黑木耳多糖的制備方法，按照下述步驟進(jìn)行：

⑴?黑木耳多糖的提取方法：

以料液比1:50-1:70（m/v），在溫度80-100℃水中提取2-4h，提取2次，合并上清液，上清液經(jīng)濃縮后，加入乙醇醇沉，使得多糖的濃縮液中乙醇濃度為60-85%（v/v），所得沉淀離心、經(jīng)冷凍干燥24-48h后得黑木耳粗多糖(AAP)；

⑵?羧甲基化黑木耳多糖的制備：