[發(fā)明專利]一種制備DL2000 DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)的方法及其產(chǎn)品和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110216792.2
• 申請日: 2011-07-29
• 公開（公告）號: CN102304508A
• 公開（公告）日: 2012-01-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 赫英俊;孫蘭菊;嚴(yán)引娣
• 申請（專利權(quán)）人: 上海捷瑞生物工程有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12N15/11;C12Q1/68;C12N15/70;C12R1/19
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 胡美強(qiáng);沈利

1.一種制備DL2000?DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)的方法，其特征在于，采用質(zhì)粒酶切法，包括以下步驟：

(1)DL2000DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)包括6個DNA片段：100bp，250bp，500bp，750bp，1kb，2kb，將該6個片段分配到兩個載體中進(jìn)行擴(kuò)增，并且使它們在載體中具有特定的拷貝數(shù)，其中該6個片段的分配和拷貝數(shù)具體如下：載體1中包含片段100bp，拷貝數(shù)10；片段250bp，拷貝數(shù)4；片段500bp，拷貝數(shù)2；片段750bp，拷貝數(shù)1；和片段1kb，拷貝數(shù)1；載體2中包含2kb，拷貝數(shù)1；和片段750bp，拷貝數(shù)4；

(2)將載體1和載體2用限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切，然后混合，即得。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，載體1是基因工程質(zhì)粒pTZ19R-250，核苷酸如序列表中SEQ?ID?NO：3所示；載體2是基因工程質(zhì)粒pUCS1-2k-750，核苷酸如序列表中SEQ?ID?NO：4所示。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所用的限制性內(nèi)切酶是HindIII。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，pTZ19R-250和pUCS1-2k-750的酶切產(chǎn)物的混合比例為2.5∶1～1.5∶1，所述的比例是pTZ19R-250和pUCS1-2k-750兩個質(zhì)粒的質(zhì)量比。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，pTZ19R-250和pUCS1-2k-750的酶切產(chǎn)物的混合比例為1.9∶1，所述的比例是pTZ19R-250和pUCS1-2k-750兩個質(zhì)粒的質(zhì)量比。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中酶切后，采用柱親和層析法純化，再混合。

7.如權(quán)利要求1～6任一項(xiàng)所述的方法制備的DL2000DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)。

8.如權(quán)利要求7所述的DL2000DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)在瓊脂糖凝膠電泳中的應(yīng)用。

9.一種基因工程質(zhì)粒pTZ19R-250，核苷酸如序列表中SEQ?ID?NO：1所示。

10.一種基因工程質(zhì)粒pUCS1-2k-750，核苷酸如序列表中SEQ?ID?NO：2所示。