[發(fā)明專利]綠豆胰蛋白酶抑制劑的分離純化方法及在魚糜制品生產(chǎn)中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110215634.5
• 申請(qǐng)日: 2011-07-29
• 公開（公告）號(hào): CN102295700A
• 公開（公告）日: 2011-12-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹敏杰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 集美大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K14/81
• 分類號(hào): C07K14/81;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/18;A23L1/326
• 代理公司: 廈門市新華專利商標(biāo)代理有限公司 35203
• 代理人: 李寧

1.一種綠豆胰蛋白酶抑制劑的分離純化方法，其特征在于包括如下步驟：

1）提取：將干燥的綠豆用粉碎機(jī)粉碎成粉末；以1：4-6?m/v比例溶于硫酸中，攪拌浸泡后，離心取其上清液為粗提液；

2）中和：向步驟1）所得的粗提液中加堿至溶液的pH呈中性；

3）熱處理：將步驟2）所得的粗提液在水浴中加熱，加熱后立即冷卻，離心收集上清液；

4）膜處理：將步驟3）所得的上清液用30?kDa分子量截留的超濾膜超濾后取外液；進(jìn)一步用5?kDa分子量截留的超濾膜超濾脫鹽制得濃縮液；

5）吸附分離解吸：將步驟4）脫鹽后的濃縮液經(jīng)Q-Sepharose或DEAE-Sepharose陰離子交換樹脂吸附分離，綠豆胰蛋白酶抑制劑吸附在樹脂上，吸附后的樹脂經(jīng)梯度淋洗解吸，得到高純度綠豆胰蛋白酶抑制劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種綠豆胰蛋白酶抑制劑的分離純化方法，其特征在于：所述的步驟1）中硫酸濃度為0.05-0.1?mol/L，攪拌浸泡時(shí)間為18-36?h，組織搗碎后，以8000-12000?g離心15-30?min，上清液為粗提液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種綠豆胰蛋白酶抑制劑的分離純化方法，其特征在于：所述的步驟2）中堿采用1-2?mol/L的NaOH。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種綠豆胰蛋白酶抑制劑的分離純化方法，其特征在于：所述的步驟3）中加熱條件采用60°C，90?min或80°C，30?min或90°C，15?min中的一種；10000-12000?g離心10-15?min，收集上清液為部分純化的綠豆胰蛋白酶抑制劑。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種綠豆胰蛋白酶抑制劑的分離純化方法，其特征在于：所述的步驟4）中的上清液用?30?kDa分子量截留的超濾膜超濾，截留大分子量蛋白，而分子量較小的蛋白則流出到外液；進(jìn)一步用5?kDa分子量截留的超濾膜超濾脫鹽，同時(shí)在超濾液中加入pH?7.5-8.0的20?mmol/L?Tris-HCl緩沖溶液或磷酸緩沖液制得濃縮液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種綠豆胰蛋白酶抑制劑的分離純化方法，其特征在于：所述的步驟5）中陰離子交換樹脂采用二乙基氨乙基或季氨基陰離子交換樹脂；吸附后的樹脂經(jīng)0-0.5?mol/L?NaCl梯度的鹽淋洗解吸，得到高純度綠豆胰蛋白酶抑制劑。

7.一種如權(quán)利要求1所述的綠豆胰蛋白酶抑制劑在魚糜制品生產(chǎn)中的應(yīng)用，其特征在于：將綠豆胰蛋白酶抑制劑添加到以海水魚或淡水魚為主要原料的魚糜制品中，混合均勻，用于增強(qiáng)魚糜彈性。

8.如權(quán)利要求7所述的一種綠豆胰蛋白酶抑制劑在魚糜制品生產(chǎn)中的應(yīng)用，其特征在于：所述的綠豆胰蛋白酶抑制劑在魚糜制品中添加的終濃度為?10-50?mg/kg以上,使魚糜制品的凝膠強(qiáng)度提高10-20%。