[發(fā)明專利]利用高溫芽孢桿菌制備脂肽類生物表面活性劑的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110215321.X
• 申請日: 2011-07-29
• 公開（公告）號(hào): CN102399847A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔡志強(qiáng);楊廣花;朱孝霖;李亮;何玉財(cái);趙希岳;李爾煬
• 申請（專利權(quán)）人: 常州大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P21/00
• 分類號(hào): C12P21/00;C12R1/07
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種能產(chǎn)生物表面活性劑的高溫芽孢桿菌，屬于高溫芽孢桿菌的菌株生產(chǎn)脂肽類生物表面活性劑的方法及其在石油開采等方面的應(yīng)用。?

背景技術(shù)

生物表面活性劑是一種公認(rèn)的多功能化學(xué)處理劑，它一方面具有化學(xué)合成表面活性劑的共性，另一方面又有穩(wěn)定性好、抗鹽性強(qiáng)、受溫度影響小、能被生物降解、無毒等優(yōu)點(diǎn)。生物表面活性劑已經(jīng)在石油、食品、化妝品及藥學(xué)等領(lǐng)域得到較廣泛的應(yīng)用，并且愈來僡受到人們的青睞。?

?微生物自身的有益活動(dòng)如降解原油或代謝產(chǎn)物如生物表面活性劑、有機(jī)酸、醇等來提高原油流動(dòng)性，而達(dá)到提高采收率的采油技術(shù)。目前，石油開采常規(guī)工藝技術(shù)采出的油量只占原始地質(zhì)儲(chǔ)量的1/3-1/2，而應(yīng)用微生物產(chǎn)生的生物表面活性劑提高石油采收率的技術(shù)(MEOR)是一項(xiàng)具有良好發(fā)展前景的3次強(qiáng)化采油技術(shù)。1968年由Arima等人發(fā)現(xiàn)的枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）生產(chǎn)的一種脂肽類表面活性劑，自被發(fā)現(xiàn)以來，受到持續(xù)關(guān)注，許多發(fā)明者致力于提高其產(chǎn)量、活性和降低生產(chǎn)成本，如何提高脂肽類生物表面活性劑的高溫穩(wěn)定性，這需要選育優(yōu)良的高溫菌株，開發(fā)高附加值產(chǎn)品，這正是本發(fā)明要解決的技術(shù)問題。?

本發(fā)明通過在油田和油井內(nèi)采樣，通過傳統(tǒng)微生物學(xué)方法和現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)篩選平臺(tái)，進(jìn)行了微生物菌種的篩選、培養(yǎng)、鑒定等，最終得到產(chǎn)脂肽類生物表面活性劑的高溫芽孢桿菌LEY₁₁。本發(fā)明采用油井內(nèi)源微生物，是一種對(duì)環(huán)境友好的內(nèi)源性高溫微生物表面活性劑，無任何污染和毒副作用。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對(duì)上述現(xiàn)有的不足，提供發(fā)酵周期短、工藝簡單的利用一株高溫芽孢桿菌的制備脂肽類生物表面活性劑的方法。?

利用高溫芽孢桿菌的制備脂肽類生物表面活性劑的方法，按照下述步驟進(jìn)行：?

（1）菌種發(fā)酵：將高溫芽孢桿菌LEY₁₁進(jìn)行發(fā)酵；接種量按體積比3～10%?(v/v)；發(fā)酵溫度為45℃~70℃，pH為6.5～8.0，轉(zhuǎn)速50～200rpm,通氣量2～8L/h，培養(yǎng)時(shí)間36～108h；

（2）分離提純：發(fā)酵液經(jīng)?8000~10000r/min離心10~20min去除菌體，上清液加入等體積的氯仿/甲醇(1~2/1~3,V/V)，萃取，取萃取液的下層液，50~70℃減壓蒸干得生物表面活性劑粗品，氯仿再次洗滌50~70℃蒸干得較純的生物表面活性劑產(chǎn)品。

[0007]?其中所述的高溫芽孢桿菌LEY11，該菌株已于2010年7月2日保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏編號(hào)為CGMCC?No.?3767，建議的分類命名為芽孢桿菌Bacillus??sp.。

其中上述高溫芽孢菌LEY₁₁采用液體培養(yǎng)基，在發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)，產(chǎn)生脂肽類生物表面活劑，液體培養(yǎng)基含有碳源、氮源和無機(jī)鹽，碳源選自3%的葡萄糖、花生油、液體石蠟、可溶性淀粉、糊精、乳糖、酵母抽提物和0.1%的萘和正十六烷；氮源選自氨基酸、黃豆餅粉、蛋白胨、硝酸銨、硫酸銨、氯化銨，無機(jī)鹽主要是硫酸鎂(MgSO₄)、硫酸錳(MnSO₄H₂O)、硫酸亞鐵(FeSO₄7H₂O)、氯化鈣(CaCl₂2H₂O)、磷酸氫二鉀(K₂HPO₄)、磷酸二氫鉀(KH₂PO₄)，其中1000mL鹽溶液中含有；MgSO₄?19.5g；MnSO₄H₂O?5g；FeSO₄7H₂O?5g；CaCl₂2H₂O?0.3g。?