[發明專利]一種大分子量T載體及其制備方法

無效

• 申請號: 201110214171.0
• 申請日: 2011-07-28
• 公開（公告）號: CN102304537A
• 公開（公告）日: 2012-01-04
• 發明（設計）人: 肖愛軍;周磊;赫英俊
• 申請（專利權）人: 上海捷瑞生物工程有限公司
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/66
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 胡美強;沈利

1.一種前T載體，其特征在于，是以已知載體為出發載體進行改良后的載體，出發載體是pBlueScript?II?SK(-)，pUC18，pUC19，pUC118，pUC119，pUC19，或pGEM系列載體，它們的多克隆位點被替換為XcmI盒，所述的XcmI盒包括ccdB基因序列以及緊密連接于所述ccdB基因序列兩側的各一個XcmI酶切位點序列，并且出發載體中的抗性基因前和/或后插入了長度為1000～2000bp的無義序列而被延長。

2.根椐權利要求1所述的前T載體，其特征在于，所述的XcmI盒還包括連接于所述各一個XcmI酶切位點序列的除XcmI酶切位點序列外的酶切位點序列。

3.根椐權利要求1或2任一項所述的前T載體，其特征在于，所述的XcmI盒的核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?NO：4，SEQ?ID?NO：5，或SEQ?ID?NO：6所示。

4.根椐權利要求1～3任一項所述的前T載體，其特征在于，所述的出發載體是pBlueScript?II?SK(-)。

5.根椐權利要求1～4任一項所述的前T載體，其特征在于，所述的抗性基因和在其前和/或后插入了無義序列后的DNA片段的核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?NO：3所示。

6.一種T載體，其特征在于，由如權利要求1～5任一項所述的前T載體經XcmI或XcmI同裂酶酶切而得。

7.根椐權利要求6所述的T載體，其特征在于，所述T載體為圖4所示的pXL-T，圖5所示的pXL01-T或圖6所示的pXL02-T。

8.根椐權利要求6或7任一項所述的T載體，其特征在于，所述T載體是核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?NO：7所示的pXL-T，核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?NO：8所示的pXL01-T，或核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?NO：9所示的pXL02-T。

9.一種制備權利要求1～5任一項所述的前T載體的方法，包括以下步驟：

1)以pBlueScript?II?SK(-)，pUC18，pUC19，pUC118，pUC119，pUC19，或pGEM系列載體為出發載體，在其多克隆位點引入引入XcmI盒，得到前T載體；所述的XcmI盒包括ccdB基因序列以及緊密連接于所述ccdB基因序列兩側的各一個XcmI酶切位點序列；

2)將所述出發載體中的Amp抗性基因延長。

10.如權利要求1～5任一項所述的前T載體和如權利要求6～8所述的T載體在基因克隆中的應用。