[發(fā)明專利]一種生物蛋白海綿及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110212713.0
• 申請日: 2011-07-28
• 公開（公告）號: CN102357259A
• 公開（公告）日: 2012-02-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王珊珊
• 申請（專利權(quán)）人: 王珊珊
• 主分類號: A61L15/32
• 分類號: A61L15/32;A61L27/26;A61L27/60
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種醫(yī)學(xué)臨床手術(shù)后和肌體創(chuàng)傷用生物蛋白海綿及其制造方法； 特別涉及一種用于人體和動物體新鮮創(chuàng)面的止血，促進細(xì)胞生長增殖能力，以及血 管和器官組織修復(fù)的生物蛋白海綿及其制備方法。

背景技術(shù)

在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中，創(chuàng)傷修復(fù)和臨床手術(shù)后肌體的生長和再生是一個相關(guān)聯(lián)的 病理生理過程，眾所周知臨床手術(shù)后及其他創(chuàng)傷修復(fù)中，它包括肌體一系列生 化、生理和形態(tài)的變化。通常情況從凝血開始到炎癥反應(yīng)、細(xì)胞浸潤、新血管 生成以及細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生等不同階段，各不同階段都是相互依存的一種有序變 化過程，這些不同的修復(fù)過程是一個唇齒相依、密不可分的整體。由于人體組 織內(nèi)的細(xì)胞都浸潤在細(xì)胞間質(zhì)液中，細(xì)胞間質(zhì)就像一個儲藏室，是細(xì)胞賴以生 存的前提。細(xì)胞間質(zhì)是由細(xì)胞產(chǎn)生的不具有細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，它包括纖 維、基質(zhì)和流體物質(zhì)(組織液、淋巴液、血漿等)，細(xì)胞間質(zhì)對細(xì)胞起著支持、 保護、連結(jié)和營養(yǎng)作用，參與構(gòu)成細(xì)胞生存的微環(huán)境(microenvironment)。細(xì) 胞間質(zhì)是肌體細(xì)胞所生活的液態(tài)環(huán)境，其細(xì)胞間質(zhì)液中含有細(xì)胞在新陳代謝時 所需要的全部生存條件；同樣的，細(xì)胞間質(zhì)液也會接受細(xì)胞的代謝產(chǎn)物，或未 被利用的物質(zhì)。因此肌體受傷時，常常出現(xiàn)肌體皮膚和器官缺損創(chuàng)面，特別是 不可避免破壞了細(xì)胞間質(zhì)，在其細(xì)胞不可能恢復(fù)的情況下，在肌體上顯現(xiàn)出轉(zhuǎn) 移皮瓣和移植皮片壞死、潰爛、感染等等狀況的發(fā)生，一般臨床上為了降低這 種現(xiàn)象的發(fā)生的幾率，通常采用注射抗生素或外部采用外敷中藥、西藥等抗感 染處理方法，但創(chuàng)傷面肌體組織細(xì)胞的存活率極低，造成修復(fù)周期長，產(chǎn)生皮 膚疤痕，肌肉缺損、組織細(xì)胞壞死等問題，并相繼造成傷口的愈合周期長、肌 體內(nèi)營養(yǎng)成分消耗大、恢復(fù)慢等不良情況發(fā)生，甚至發(fā)生再手術(shù)率高等特點。 為了縮短傷口愈合時間及減少再手術(shù)率這一技術(shù)難題，長時間以來，國內(nèi)外醫(yī) 學(xué)界在該領(lǐng)域進行了不斷地探索和研究，自八十年代以來有關(guān)利用生長因子對 肌體創(chuàng)傷和醫(yī)療手術(shù)后肌體組織修復(fù)作用進行了大量地研究和臨床應(yīng)用，使人 們對現(xiàn)代創(chuàng)傷修復(fù)的理念發(fā)生了根本的改變。拋開了傳統(tǒng)的單一的解決傷口的 某一方面的問題，一是肌體組織修復(fù)的內(nèi)涵已從單純的體表愈合發(fā)展到細(xì)胞組 織的修復(fù)過程；二是通過人工干預(yù)創(chuàng)面的自然愈合過程可以通過生長因子得到 某種程度的“促進”或“恢復(fù)”組織細(xì)胞成活的效果。生長因子生物活性極不 穩(wěn)定，對生理環(huán)境敏感，易被蛋白酶降解，在體內(nèi)半衰期極短；經(jīng)長期研究中 發(fā)現(xiàn)生長因子與膠原蛋白相互依存的生物理論。人體組織內(nèi)的細(xì)胞都浸潤在細(xì) 胞間質(zhì)液中，細(xì)胞和液體之間不斷地進行著物質(zhì)交換，吸取氧分和養(yǎng)料，排出 二氧化碳等廢物，為了不使創(chuàng)傷面細(xì)胞本身被產(chǎn)生的廢物所破壞，充分讓細(xì)胞 間質(zhì)液不斷地更新。我們研發(fā)了利用新鮮哺乳動物結(jié)締組織或皮的細(xì)胞間質(zhì)較 多這一優(yōu)勢，因為動物的結(jié)締組織(connective?tissue)或皮是由細(xì)胞和大量細(xì) 胞間質(zhì)構(gòu)成的，細(xì)胞間質(zhì)包括基質(zhì)、細(xì)絲狀的纖維和不斷循環(huán)更新的組織液； 另外由于制作生物蛋白海綿的原料是以新鮮動物的結(jié)締組織或皮為原料制備 的，在臨床應(yīng)用過程中勢必存在人畜共患病原微生物交叉感染的可能，為避免 這類潛在危險的發(fā)生，除加強對原料的篩選和控制外，在制備過程中進行二次 病毒滅活的過程，即采用向溶液中加入有機溶劑/去污劑(Solvent/Detergent) 的辦法滅活脂包膜病毒，即S/D滅活病毒。通過病毒滅活驗證，以偽狂犬病毒 (Pseudorabies?virus?PRV)，水泡性口炎病毒(Vesicular?stomatitis?virus?VSV) 作為指示病毒，證明S/D滅活病毒的可行性，同時添加蔗糖溶液、甘氨酸為保 護劑，具有不使生物蛋白變性和不影響膠原蛋白的回收率等特點；并采用CM陽 離子色譜純化工序，純化掉多余的聚山梨酯80、磷酸三丁酯，即聚山梨酯80殘 留量小于100ug/ml，磷酸三丁酯殘留量小于10ug/ml，殘留量符合《中國藥典》 2010版第三部規(guī)定的要求；同時采用加熱滅活病毒工藝代替?zhèn)鹘y(tǒng)的鈷60輻射滅 菌方法，實現(xiàn)臨床應(yīng)用上安全可靠，這是本行業(yè)制備工藝方法的一種新突破， 也為未來行業(yè)的發(fā)展方向奠定了基礎(chǔ)；試驗中我們還發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)的透析工序制備 周期長，一般在48小時以上，為了更好地保護生物蛋白活性，縮短制備周期， 用超濾工藝替代了透析工序，不僅降低了生產(chǎn)成本，縮短制備周期40小時以上， 而且極大地提高了生物蛋白的活性；上述本發(fā)明的技術(shù)方案的形成，這對于利 用生化理論應(yīng)用到臨床醫(yī)療具有重要的功能性意義。