[發明專利]一種生物蛋白海綿及其制備方法

無效

• 申請號: 201110212713.0
• 申請日: 2011-07-28
• 公開（公告）號: CN102357259A
• 公開（公告）日: 2012-02-22
• 發明（設計）人: 王珊珊
• 申請（專利權）人: 王珊珊
• 主分類號: A61L15/32
• 分類號: A61L15/32;A61L27/26;A61L27/60
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種生物蛋白海綿，它包括細胞間質、生長因子、凝血因子，其特征在于是以細 胞間質為基質，均勻的添加一定比例的生長因子、凝血因子，通過冷凍干燥技術 制備成海綿狀。

2.根據權利要求1所述的生物蛋白海綿，其特征在于所述細胞間質由膠原 蛋白、糖蛋白、蛋白多糖組成。

3.根據權利要求2所述的生物蛋白海綿，其特征在于所述膠原蛋白由I型 和III型膠原蛋白為主的19種其他型膠原蛋白組成。

4.根據權利要求1所述的生物蛋白海綿，其特征在于所述生長因子分為： 堿性成纖維細胞生長因子、酸性成纖維細胞生長因子、表皮細胞生長因子、神 經生長因子、結締組織生長因子、肽類生長因子、轉化生長因子、血小板源生 長因子。

5.根據權利要求1所述的生物蛋白海綿，其特征在于所述凝血因子分為： 凝血酶因子、纖維蛋白原因子、XIII因子。

6.根據權利要求1所述的生物蛋白海綿，其特征在于所述生物蛋白海綿每 平方厘米生長因子、凝血因子的含量為30～300IU。

7.一種生物蛋白海綿的制備方法，采用如下工藝流程：以新鮮哺乳動物的 結締組織或皮為原料：脫脂工序——粉碎工序——酶解工序——S/D病毒滅活工 序——一次鹽析沉淀工序——離心分離工序——二次鹽析工序——CM陽離子交 換色譜純化工序——超濾工序——配制工序—過濾除菌工序—分裝工序——凍 干工序——切割工序——內包裝工序——二次滅活病毒工序——檢驗工序—— 成品包裝工序——入庫。

包括以下步驟：

步驟1、選取原料和脫脂處理：取新鮮哺乳動物的結締組織或皮為原料，進 行脫脂處理；其工藝如下：將新鮮哺乳動物的結締組織或皮放入不銹鋼桶中， 按原料與10～35％碳酸鈉溶液1∶1～10的比例，浸泡5～60min，定時攪拌；浸 泡后撈出，先用水反復沖洗數次，再用純化水反復沖洗5～10次；瀝凈水分， 用不銹鋼刀具刮凈原料上的油脂或毛囊等雜質；

步驟2、粉碎工序：先用切絲機將原料切成條狀，然后倒入絞肉機中粉碎， 倒入不銹鋼桶中，加入75％乙醇溶液浸泡5～60min撈出，用純化水反復沖洗5～ 10次，再用注射用水反復沖洗2～5次，瀝干；

步驟3、酶解工序：按1kg∶5-30kg的比例加入注射用水混勻，倒入膠體磨 中勻漿；勻漿液轉入酶解罐中，緩慢滴加鹽酸溶液，調一定PH值；按1kg原料 加入1～10g胃蛋白酶，酶解溫度控制在10℃～35℃之間，攪拌勻漿液PH值為 2.0～4.0時終止，此時酶解液成粘稠、均勻的膠狀流體；

步驟4、S/D病毒滅活工序：即脂胞膜病毒滅活，酶解液與注射用水按1∶1～ 10的比例進行稀釋、混勻，用孔徑為40μm的濾芯進行粗濾，再用孔徑為1.0μm 濾芯進行精濾至病毒滅活罐中，加入保護劑，達到終濃度為0.5～1.5％，在連 續攪拌的狀態下，緩慢加入S/D病毒滅活液，即聚山梨酯80的濃度為1％，磷 酸三丁酯的濃度為0.3％，攪拌均勻，采用24±1℃病毒滅活6h即可；

步驟5、鹽析離心工序：溶液加入1～20倍(W/W)注射用水，混勻，按1∶ 1～5的比例加入飽和氯化鈉溶液，攪勻，用連續流離心機10000～17000rpm 離心分離沉淀；取沉淀物加入1～20倍(W/W)注射用水，攪勻，使沉淀溶解 完全，進行二次鹽析，再進行離心分離，收集沉淀物；其沉淀物與10～25倍 注射水溶解，轉入CM陽離子色譜純化工序；

步驟6、CM陽離子交換色譜純化工序：將裝有CM陽離子交換樹脂的色譜 柱(10×100CM，華美公司)進行平衡，上樣速度為3.0～6.0ml/min，然后用 pH＝4.0、濃度為0.3～0.6mol/L的氯化鈉溶液進行洗脫，收集細胞間質洗脫液；

步驟7、超濾工序：將收集的細胞間質洗脫液用優選孔徑為10kD還可使用 20kD、30kD的超濾器超濾(Millipore)，進行濃縮脫鹽處理，收集截留液；

步驟8、配制工序：以截留液的生物蛋白含量與生長因子、凝血因子以一定 比例進行配制，pH值為4.5～7.5；

步驟9、過濾除菌工序：將配制好的溶液依次用孔徑為0.45μm和0.22μm濾 芯(PALL)過濾，分裝；

步驟10、凍干工序：通過低溫冷凍干燥將加有生長因子、凝血因子溶液中 的水分去除，采用-20℃～-45℃進行冷凍1～5h，抽真空干燥，20℃～40℃恒溫 1～5h；

步驟11、二次滅活病毒工序：將凍干后的產品進行加熱滅活病毒，溫度為 60～100℃、時間為0.5～144h；

以下工序都在潔凈區中進行分裝工序、切割工序、內包裝工序、檢驗工序、 成品包裝工序、入庫。