[發明專利]一種雞傳染性法氏囊病基因工程亞單位疫苗的制備和應用

有效

• 申請號: 201110212212.2
• 申請日: 2011-07-27
• 公開（公告）號: CN102277374B
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發明（設計）人: 徐素珍;藍勝芝;趙艷敏;黃芳;吳桃芬
• 申請（專利權）人: 浙江諾倍威生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/81
• 分類號: C12N15/81;A61K39/12;A61P31/14;C12N15/40;C12R1/84
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種重組表達雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白亞單位的方法，其特征 在于，該方法包括：

(1)提供改造的VP2蛋白亞單位編碼基因；其中，在所述的VP2蛋白亞單 位編碼基因的5’端起始密碼子ATG之前添加蛋白酶KEX2的切割序列，在所 述的VP2蛋白亞單位編碼基因的3’端添加終止密碼子序列；

(2)將(1)所述的VP2蛋白亞單位編碼基因插入到酵母表達載體pPICZαA 的α-factor信號肽編碼序列下游，獲得重組表達載體；

(3)將(2)的重組表達載體電轉化畢赤酵母X-33菌株，獲得重組的畢赤酵 母細胞；電轉化條件為：0.2cm電轉杯，電壓2.0KV，電擊時間5ms，質粒濃 度為7-10μg/10μL，感受態細胞100μL；電轉化后快速加入1mL1M山梨糖醇， 30℃復蘇1小時；

(4)將(3)的重組的畢赤酵母細胞進行重組表達，表達條件為：采用誘導培 養基BMMY，培養基PH值為6.5±0.5，誘導溫度為28.5±1℃，甲醇終濃度為 0.5±0.2%(v/v)；從表達上清中獲得雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白亞單位；

步驟(1)中，還在所述的蛋白酶KEX2的切割序列的5’端之前添加XhoI 酶切位點序列；在所述的終止密碼子序列的3’端添加NotI酶切位點序列；

所述的改造的VP2蛋白亞單位編碼基因的序列如SEQ?ID?NO:1所示。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，將所述的VP2蛋 白亞單位編碼基因插入到酵母表達載體pPICZαA的XhoI/NotI酶切位點之間。

3.一種制備傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白亞單位疫苗的方法，其特征在 于，該方法包括：

以權利要求1所述的方法獲得雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白亞單位，進 行乳化，獲得傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白亞單位疫苗。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述的乳化是將所述的雞傳染 性法氏囊病病毒VP2蛋白亞單位與白油司本進行混合、乳化。

5.一種用于重組表達雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白亞單位的多核苷酸， 其特征在于，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。