[發(fā)明專利]一種懸浮細(xì)胞的免疫熒光染色方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110211736.X
• 申請日: 2011-07-27
• 公開（公告）號: CN102288471A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫璨;朱勇;楊施;胡洪亮;李錚
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30
• 代理公司: 上海卓陽知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31262
• 代理人: 巫蓓麗

1.一種懸浮細(xì)胞的免疫熒光染色方法，其特征在于，所述的染色方法包括以下步驟：先收集細(xì)胞于離心管中，800g離心收集細(xì)胞，然后分別加入多聚甲醛固定、Triton-X100通透、1%?BSA封閉，再依次加入一抗、二抗孵育，以上每步操作后都采用800g離心的方法進(jìn)行洗滌，最后DAPI染色后，滴至載玻片上封片觀察。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的染色方法，其特征在于，所述的染色方法包括以下步驟：

a、收集細(xì)胞或大細(xì)胞團(tuán)（細(xì)胞總數(shù)為10⁶-10⁷）于2ml離心管中；

b、加入2ml?PBS，溫和上下顛置，800g離心5min，棄上清；

c、重復(fù)b步驟，去除培養(yǎng)基中血清的影響；

d、加入2ml蒸餾水，溫和上下顛置，800g離心5min，棄上清；

e、加入1ml?4%?多聚甲醛，放置10min；其間每隔2min輕彈管底數(shù)次，使細(xì)胞充分接觸溶液；800g離心5min，棄上清；

f、重復(fù)b、c、d步驟；

g、加入1ml?0.4%?Triton-X-100通透細(xì)胞，放置10-20min；其間每隔5min輕彈管底數(shù)次，使細(xì)胞充分接觸溶液；800g離心5min，棄上清；

h、重復(fù)b、c、d步驟；

i、加入1ml?1%?BSA或山羊血清，室溫放置30min，以封閉細(xì)胞表面的非特異性抗原；其間每隔5min輕彈管底數(shù)次，使細(xì)胞充分接觸溶液；800g離心5min，棄上清；

j、加入一抗，室溫放置2h或者4℃過夜；

k、重復(fù)b、c、d步驟；

l、避光加入熒光標(biāo)記的二抗，室溫放置1h；

m、重復(fù)b、c、d步驟；

n、加入DAPI和10ul蒸餾水，室溫避光放置5min；

o、用移液器將細(xì)胞滴至載玻片上，晾干，加含抗熒光淬滅劑的封片劑封片。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的染色方法，其特征在于，所述的細(xì)胞為懸浮細(xì)胞。