[發(fā)明專利]一種甘薯病毒病血清檢測取樣方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110210962.6
• 申請日: 2011-07-20
• 公開（公告）號: CN102305727A
• 公開（公告）日: 2012-01-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 謝逸萍;孫厚俊;王欣;趙永強;邢繼英;陳曉宇
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇徐州甘薯研究中心
• 主分類號: G01N1/10
• 分類號: G01N1/10;G01N1/28
• 代理公司: 徐州市三聯(lián)專利事務(wù)所 32220
• 代理人: 何君

1.一種甘薯病毒病血清檢測取樣方法，其特征是：按如下步驟進行：

(1)參試樣品準備：從田間取回待檢測的脫毒甘薯樣品(取葉片加葉柄)；

(2)取樣：對塑料袋進行編號，用直徑15mm試管取葉片和葉柄的結(jié)合部，需隔在塑料袋外取，只留葉片和葉柄的結(jié)合部，其余除去；

(3)檢測樣品的制備：加1ml提取緩沖液，用玻璃試管在塑料袋外碾磨，室溫放置20-30分鐘，使植物汁液充分提取；

(4)點樣：a、將一張干燥的濾紙放在實驗臺上，將膜放在上面，避免氣泡產(chǎn)生；b、用一個無菌的槍頭吸塑料袋中提取液上清部分(15-20微升)，點在膜上方格正中，不要用槍頭碰到膜，一個樣品用一個槍頭，點樣過程中一直戴手套和用鑷子接觸膜，手指印可能造成假陽性結(jié)果；

(5)設(shè)陽性對照：在每張膜的最后設(shè)置陽性對照，點樣完成將膜轉(zhuǎn)到一張干燥的濾紙上，干燥15-20分鐘，在繼續(xù)實驗前可以用兩張濾紙夾著膜保存；

(6)血清學檢測：血清學檢測根據(jù)酶聯(lián)包中的步驟進行：封閉液孵育60分鐘→TBS快速洗膜→加入病毒抗體液50rpm孵育過夜→倒掉病毒抗體液加T-TBS100rpm洗膜3次→加入酶標抗體液50rpm孵育1小時→除去酶標抗體液，用30mlT-TBS洗膜4次→將膜放入裝有染色液的培養(yǎng)皿中，50rpm孵育30分鐘→用蒸餾水100rpm洗膜3次，終止顯色→濾紙吸干水分，記錄顯色結(jié)果，陽性的表示含有病毒。