[發明專利]黑水纈草不定根培養生產纈草素的方法

無效

• 申請號: 201110208935.5
• 申請日: 2011-07-25
• 公開（公告）號: CN102293157A
• 公開（公告）日: 2011-12-28
• 發明（設計）人: 王振宇;崔磊;周秀華;趙海田
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;C07D311/94
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 韓末洙

1.黑水纈草不定根培養生產纈草素的方法，其特征在于黑水纈草不定根培養生產纈草素的方法，按以下步驟進行：一、黑水纈草無菌苗的培養：將黑水纈草種子于-4℃冷凍7天，然后對種子進行除菌處理，之后置于不含激素的1/2MS培養基上萌發，得到幼苗，將幼苗移植到不含激素的MS培養基上培養，在16h光照條件下培養20～40天，得到黑水纈草無菌苗；二、取黑水纈草無菌苗的葉片置于固體培養基上，在無菌、24～26℃條件下進行暗培養，4周后誘導出不定根，將不定根置于固體培養基中繼代培養，每4周繼代培養一次；三、將步驟二誘導出的不定根接種到液體培養基中進行懸浮培養，在無菌、24～26℃、55～65r/min搖床轉速下進行暗培養，4周后得到不定根，將得到的不定根置于液體培養基中繼代培養，每4周繼代培養一次；四、將步驟三繼代培養得到的不定根經過冷凍干燥后，研磨成粉末，用二氯甲烷在25～30℃超聲浸提粉末30min，離心后收集上清液，然后再重復超聲浸提沉淀2次，離心后收集上清液，合并上清液，得提取液，對提取液進行真空過濾，干燥后得到提取物，即完成黑水纈草不定根培養生產纈草素；其中步驟二所述固體培養基為含有1mg/L?2，4-D、0.2mg/L?KT和6g/L瓊脂的MS培養基，步驟三所述液體培養基為含有0.2mg/L?IBA和0.2mg/L?KT的MS培養基。

2.根據權利要求1所述的黑水纈草不定根培養生產纈草素的方法，其特征在于步驟一所述對種子進行除菌處理的方法為：用無菌水將種子浸泡12h，再用無菌水涮洗5次，然后用滅菌后的濾紙吸干種子表面水分，將種子包裹于無菌紗布中，浸泡在體積濃度為75％乙醇中1分鐘，無菌水清洗2次，再置于質量濃度0.1％的HgCl₂中5分鐘，然后用無菌水清洗5次，用滅菌后的濾紙吸干表面水分。

3.根據權利要求1或2所述的黑水纈草不定根培養生產纈草素的方法，其特征在于步驟一所述在16h光照條件下培養30天。

4.根據權利要求3所述的黑水纈草不定根培養生產纈草素的方法，其特征在于步驟三中搖床轉速為60r/min。

5.根據權利要求4所述的黑水纈草不定根培養生產纈草素的方法，其特征在于步驟四中用二氯甲烷在25℃超聲浸提粉末30min。

6.根據權利要求4所述的黑水纈草不定根培養生產纈草素的方法，其特征在于步驟四中用二氯甲烷在30℃超聲浸提粉末30min。