[發(fā)明專利]一種腺苷鈷胺的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110208134.9
• 申請日: 2011-07-25
• 公開（公告）號: CN102321137A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張拴兵;王玉鋒
• 申請（專利權(quán)）人: 河北玉星生物工程有限公司
• 主分類號: C07H23/00
• 分類號: C07H23/00;C07H1/06;C12P19/42;C12R1/38
• 代理公司: 石家莊匯科專利商標事務(wù)所 13115
• 代理人: 劉聞鐸

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及化工制藥領(lǐng)域，具體的說，是一種制備腺苷鈷胺的方法。

背景技術(shù)

腺苷鈷胺是維生素B₁₂的系列產(chǎn)品之一，化學(xué)名為：5，6-二甲基苯并咪唑-5’-脫氧腺嘌呤核苷基鈷胺，是一個八面體形鈷胺絡(luò)合物，分子式：C₇₂H₁₀₀CoN₁₈O₁₇P，分子量為：1579.60。腺苷鈷胺為暗紅色結(jié)晶和非結(jié)晶性粉末，吸濕性強，見光易分解。腺苷鈷胺是維生素B₁₂系列產(chǎn)品的重要品種，屬原料藥，具有重要的醫(yī)用價值。

目前腺苷鈷胺的制備方法主要包括下述幾種。

一種為化學(xué)法，即先將微生物發(fā)酵生成的腺苷鈷胺轉(zhuǎn)化為氰鈷胺，加入酶經(jīng)合成法轉(zhuǎn)化為腺苷鈷胺，此法有西班牙interquim公司申報了專利號為200510119016.5的專利，但目前市場上還沒有該法生產(chǎn)的腺苷鈷胺。

我國腺苷鈷胺的生產(chǎn)一直采用發(fā)酵液提取法，發(fā)酵液分為耗氧發(fā)酵液和厭氧發(fā)酵液。之前，有華藥康欣有限公司和河北華容制藥有限公司生產(chǎn)，采用的菌種為厭氧的薛氏丙酸菌，提取工藝采取大孔樹脂和二步酸性氧化鋁和一步中性氧化鋁制備工藝，該工藝發(fā)酵單位低，氧化鋁的分離提取能力低，損失量大，處理量小，因此產(chǎn)量低，收率低，勞動強度大，且環(huán)境污染嚴重，生產(chǎn)成本高，限制了腺苷鈷胺的生產(chǎn)和應(yīng)用。該工藝腺苷鈷胺的收率為30％左右，維生素B₁₂的總收率為65％左右。

另有河北華榮制藥有限公司申報的專利號為CN101948494?A的發(fā)明專利，名稱為一種腺苷鈷胺提取方法，該方法為：采用耗氧發(fā)酵液或厭氧發(fā)酵液提取腺苷鈷胺，其對于耗氧發(fā)酵液的提取方法為：先水解發(fā)酵液，后經(jīng)大孔樹脂提取和氧化鋁精制制備腺苷鈷胺，該工藝的缺陷在于：由于先水解，胞內(nèi)含量及純度高的腺苷鈷胺進入成分復(fù)雜的胞外液中，再對復(fù)雜的水解濾液進行提取，增加了提取的難度，因此提取收率低，表現(xiàn)為：腺苷鈷胺收率低，為50％以上；維生素B₁₂的總收率低，僅為80％以上。另外，提取工藝中仍然采用氧化鋁精制工藝，提取能力低，損失量大，收率低，勞動強度大，且環(huán)境污染嚴重，生產(chǎn)成本高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種腺苷鈷胺的制備方法，采用全樹脂提取和精制，操作簡便，穩(wěn)定性高，對環(huán)境友好，可極大的提高腺苷鈷胺的收率和質(zhì)量，同時降低生產(chǎn)成本。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案如下。

一種腺苷鈷胺的制備方法，其步驟包括：

①向腺苷鈷胺發(fā)酵液中加入絮凝劑和助濾劑，過濾，得菌絲體和一次濾液；

②菌絲體加水懸浮，并加入沉降劑，調(diào)PH為4.5～6.0，加熱使細胞壁破壁，過濾，得懸浮濾液；

③懸浮濾液經(jīng)陽離子交換樹脂進行交換，并用弱堿置換得到陽柱解析液；

④在陽柱解析液中加入沉降劑，調(diào)PH為4.5～6.0，過濾，得二次濾液；

⑤二次濾液經(jīng)大孔樹脂柱吸附、展層、解析得到大孔解析液；

⑥大孔解析液經(jīng)蒸發(fā)去除丙酮得到濃縮液；

⑦濃縮液經(jīng)陰離子交換樹脂交換，得到脫色液；

⑧先將脫色液PH調(diào)為4.5～6.0，再經(jīng)大孔樹脂吸附，解析得到結(jié)晶原液；

⑨向結(jié)晶原液中加入丙酮，經(jīng)動態(tài)結(jié)晶、靜態(tài)結(jié)晶，得到成品腺苷鈷胺。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選技術(shù)方案，步驟①中所述腺苷鈷胺發(fā)酵液是以脫氮假單孢菌為生產(chǎn)菌制備的。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選技術(shù)方案，步驟①中所述絮凝劑為二價鋅離子，其用量為3～7kg/立方米發(fā)酵液，所述助濾劑為二價鈣離子，其用量為2～5kg/立方米發(fā)酵液。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選技術(shù)方案，所述絮凝劑為氯化鋅或硫酸鋅；所述助濾劑為氯化鈣。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選技術(shù)方案，步驟②中懸浮操作時水與菌絲體的重量比為(4～6)∶1；沉降劑的用量為菌絲體濾泥重量的0.2～0.4％；細胞壁破壁操作時的加熱溫度為80～92℃，加熱持續(xù)時間為20～40分鐘。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選技術(shù)方案，步驟③中采用陽離子交換樹脂交換腺苷鈷胺，其置換劑為5～8％氨水溶液，得到的陽柱解析液用7％的鹽酸調(diào)PH為4.5～6.0。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選技術(shù)方案，步驟④中沉降劑的用量為6～10Kg/立方米陽柱解析液；沉降劑為聚合氯化鋁和氯化鎂的等質(zhì)量配比混合物。