[發明專利]一種腺苷鈷胺的制備方法

有效

• 申請號: 201110208134.9
• 申請日: 2011-07-25
• 公開（公告）號: CN102321137A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發明（設計）人: 張拴兵;王玉鋒
• 申請（專利權）人: 河北玉星生物工程有限公司
• 主分類號: C07H23/00
• 分類號: C07H23/00;C07H1/06;C12P19/42;C12R1/38
• 代理公司: 石家莊匯科專利商標事務所 13115
• 代理人: 劉聞鐸

1.一種腺苷鈷胺的制備方法，其特征步驟包括：

①向腺苷鈷胺發酵液中加入絮凝劑和助濾劑，過濾，得菌絲體和一次濾液；

②菌絲體加水懸浮，并加入沉降劑，調PH為4.5～6.0，加熱使細胞壁破壁，過濾，得懸浮濾液；

③懸浮濾液經陽離子交換樹脂進行交換，并用弱堿置換得到陽柱解析液；

④在陽柱解析液中加入沉降劑，調PH為4.5～6.0，過濾，得二次濾液；

⑤二次濾液經大孔樹脂柱吸附、展層、解析得到大孔解析液；

⑥大孔解析液經蒸發去除丙酮得到濃縮液；

⑦濃縮液經陰離子交換樹脂交換，得到脫色液；

⑧先將脫色液PH調為4.5～6.0，再經大孔樹脂吸附，解析得到結晶原液；

⑨向結晶原液中加入丙酮，經動態結晶、靜態結晶，得到成品腺苷鈷胺。

2.根據權利要求1所述的腺苷鈷胺的制備方法，其特征在于：步驟①中所述腺苷鈷胺發酵液是以脫氮假單孢菌為生產菌制備的。

3.根據權利要求1所述的腺苷鈷胺的制備方法，其特征在于：步驟①中所述絮凝劑為二價鋅離子，其用量為3～7kg/立方米發酵液，所述助濾劑為二價鈣離子，其用量為2～5kg/立方米發酵液。

4.根據權利要求3所述的腺苷鈷胺的制備方法，其特征在于：所述絮凝劑為氯化鋅或硫酸鋅；所述助濾劑為氯化鈣。

5.根據權利要求1所述的腺苷鈷胺的制備方法，其特征在于：步驟②中懸浮操作時水與菌絲體的重量比為(4～6)∶1；沉降劑的用量為菌絲體濾泥重量的0.2～0.4％；細胞壁破壁操作時的加熱溫度為80～92℃，加熱持續時間為20～40分鐘。

6.根據權利要求1所述的腺苷鈷胺的制備方法，其特征在于：步驟③中采用陽離子交換樹脂交換腺苷鈷胺，其置換劑為5～8％氨水溶液，得到的陽柱解析液用7％的鹽酸調PH為4.5～6.0。

7.根據權利要求1所述的腺苷鈷胺的制備方法，其特征在于：步驟④中沉降劑的用量為6～10Kg/立方米陽柱解析液；沉降劑為聚合氯化鋁和氯化鎂的等質量配比混合物。

8.根據權利要求1所述的腺苷鈷胺的制備方法，其特征在于：步驟⑥中蒸發操作進行至濃縮液的密度≥0.990g/ml。

9.根據權利要求1所述的腺苷鈷胺的制備方法，其特征在于：步驟⑧中用20％的醋酸將脫色液PH調為4.5～6.0，經大孔樹脂吸附，再用0.930～0.990g/ml的丙酮水溶液解析得到含腺苷鈷胺的結晶原液，其中，丙酮水的用量為大孔樹脂體積的2～3倍。

10.根據權利要求1所述的腺苷鈷胺的制備方法，其特征在于：步驟⑨中，在攪拌下向結晶原液中加入0.79～0.81g/ml的丙酮，使得最終溶液的密度為0.820～0.840g/ml，攪拌1～2h，靜置3～6h后，過濾、洗滌、過篩、干燥，得腺苷鈷胺成品。