[發明專利]一種rhIL-12工程細胞大規模無血清培養方法

有效

• 申請號: 201110208009.8
• 申請日: 2011-07-20
• 公開（公告）號: CN102268407A
• 公開（公告）日: 2011-12-07
• 發明（設計）人: 田志剛;程民;魏海明;鄭曉東;孫汭;費保珍
• 申請（專利權）人: 中國科學技術大學
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 王旭

1.一種rhIL-12工程細胞大規模無血清培養方法，包括下述步驟：

將處于對數生長期的rhIL-12工程細胞接種于無血清無蛋白培養基中培養，所述培養基為含有終濃度分別為0.8-1.2mM的丙酮酸鈉、0.075-0.125mM的次黃嘌呤、0.012-0.020mM的胸腺嘧啶脫氧核苷、0.5-0.9mg/L的腺嘌呤核苷、0.5-0.9mg/L的鳥嘌呤核苷、0.5-0.9mg/L的胞嘧啶核苷、0.5-0.9mg/L的尿嘧啶核苷、0.4-0.8mg/L的L-谷氨酰胺、0.4-0.8mg/L的L-天冬酰胺、1.5-2.0mg/L的L-脯氨酸、0.08-0.125mM的非必需氨基酸的CD?CHO液體培養基。

2.根據權利要求1所述的rhIL-12工程細胞大規模無血清培養方法，其中所述培養在發酵罐中進行。

3.根據權利要求1或2所述的rhIL-12工程細胞大規模無血清培養方法，其中維持所述培養基中的殘糖濃度為10mmol/L。

4.根據權利要求1-3中任意一項所述的rhIL-12工程細胞大規模無血清培養方法，其中維持所述培養基中的殘糖濃度在10mmol/L以上，并且控制乳酸濃度在20mmol/L以下。

5.根據權利要求1-4中任意一項所述的rhIL-12工程細胞大規模無血清培養方法，其中所述rhIL-12工程細胞通過加壓培養基篩選獲得，所述加壓培養基為含有終濃度分別為1.0mM的丙酮酸鈉、0.1mM的次黃嘌呤、0.016mM的胸腺嘧啶脫氧核苷、0.7mg/L的腺嘌呤核苷、0.7mg/L的鳥嘌呤核苷、0.7mg/L的胞嘧啶核苷、0.7mg/L的尿嘧啶核苷、0.6mg/L的L-谷氨酰胺、0.6mg/L的L-天冬酰胺、1.7mg/L的L-脯氨酸、0.1mM的非必需氨基酸、500μM的甲硫氨酸亞砜、800mg/L的G418的CD?CHO液體培養基。

6.根據權利要求1-5中任意一項所述的rhIL-12工程細胞大規模無血清培養方法，其中包括灌流培養的步驟。

7.根據權利要求1-6中任意一項所述的rhIL-12工程細胞大規模無血清培養方法，其中包括收集與保存所述培養基上清中的rhIL-12的步驟。

8.根據權利要求1-7中任意一項所述的rhIL-12工程細胞大規模無血清培養方法，其中通過所述方法獲得的rhIL-12含量在5mg/L以上。

9.根據權利要求1-8中任意一項所述的rhIL-12工程細胞大規模無血清培養方法，其中通過所述方法獲得的rhIL-12中p40和p35的比例為1∶1。

10.一種rhIL-12工程細胞無血清無蛋白培養基，所述培養基為含有終濃度分別為0.8-1.2mM的丙酮酸鈉、0.075-0.125mM的次黃嘌呤、0.012-0.020mM的胸腺嘧啶脫氧核苷、0.5-0.9mg/L的腺嘌呤核苷、0.5-0.9mg/L的鳥嘌呤核苷、0.5-0.9mg/L的胞嘧啶核苷、0.5-0.9mg/L的尿嘧啶核苷、0.4-0.8mg/L的L-谷氨酰胺、0.4-0.8mg/L的L-天冬酰胺、1.5-2.0mg/L的L-脯氨酸、0.08-0.125mM的非必需氨基酸的CD?CHO液體培養基。