[發(fā)明專利]柑桔多甲氧基黃酮的提取及純化方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110207429.4
• 申請日: 2011-07-22
• 公開（公告）號: CN102344429A
• 公開（公告）日: 2012-02-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄭美瑜;陸勝民;夏其樂;楊穎;陳劍兵;邢建榮
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C07D311/30
• 分類號: C07D311/30;C07D311/40
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務(wù)所有限公司 33214
• 代理人: 沈伾伾

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及農(nóng)副產(chǎn)品有效成分的提取及純化技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從柑桔皮中提取及純化活性成分多甲氧基黃酮的方法。?

背景技術(shù)

我們知道，柑桔富含黃酮類物質(zhì)，其中的多甲氧基黃酮是柑桔中所特有的，川陳皮素(Nobiletin)、桔皮素(Tangeretin)是其中的代表，它們主要分布在柑桔皮的油胞中，含量在0.4～0.6mg/g。這類物質(zhì)由于其具有平面結(jié)構(gòu)，含有多個甲氧基，極性低，因此具有多種藥理作用如抗癌、抗炎、抗氧化、抗誘變以及降低膽固醇等作用，特別其在抗癌方面的作用要比其它黃酮類強。?

目前對柑桔多甲氧基黃酮主要采用溶劑提取法進行粗提，然后用超臨界流體色譜和高效液相制備色譜法對粗提物進行分離純化，這兩種提純方法雖然所得多甲氧基黃酮單體的含量較高(90％以上)，但都還存在設(shè)備價格昂貴，工藝步驟繁瑣，制備成本高等缺點；還有是采用聚酰胺柱和葡聚糖凝膠柱兩次純化柑桔皮粗提物，雖然得到的多甲氧基黃酮含量也較高，但是分離工序較復(fù)雜，而且這兩種分離介質(zhì)價格也較昂貴。大孔樹脂是一種多孔的聚合物吸附劑，通過選擇適宜的樹脂可以對目標分離物具有較好的吸附作用，然后通過適宜的洗脫劑洗脫下來達到分離純化的目的，它具有成本低廉，易得，組裝簡單，分離效果好的優(yōu)點，其純化的純度基本可以滿足食品、保健品等的需要。因此，本發(fā)明針對這一現(xiàn)狀，根據(jù)多甲氧基黃酮的特性設(shè)計出一種成本低廉、工藝簡單、經(jīng)濟環(huán)保，并適用于工業(yè)化生產(chǎn)的方法，所得到的多甲氧基黃酮含量較高，可以進一步開發(fā)成功能食品添加劑、保健品或藥品。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是，針對已有柑桔多甲氧基黃酮粗提物純化設(shè)備昂貴，工藝繁雜，成本太高，難以實現(xiàn)工業(yè)化的缺陷，提出一種純化工藝合理，產(chǎn)品純度高、得率較高，成本低廉，能滿足食品、保健品等的需要，能用于工業(yè)化生產(chǎn)的柑桔多甲氧基黃酮的提取及純化方法。?

本發(fā)明的設(shè)計前期對柑桔多甲氧基黃酮吸附率與洗脫率均較高的大孔樹脂進行了篩選，從中測定、篩選出對川陳皮素和桔皮素單體吸附率和洗脫率均較高的大孔樹脂(見試驗例1)，以用于對本發(fā)明柑桔多甲氧基黃酮粗提物的純化。?

本發(fā)明目的通過以下技術(shù)方案得以實現(xiàn)：?

柑桔多甲氧基黃酮粗提物的提取與純化方法，該方法按以下步驟進行：?

(1)柑桔多甲氧基黃酮的提取：?

1)柑桔皮的預(yù)處理：將柑桔皮干燥至含水量≤5％，磨粉過30目篩后，備用；?

2)柑桔多甲氧基黃酮的粗提與萃取：將柑桔皮粉和水按重量體積500g∶5L比例拌勻，加熱到100℃提取1h、過濾得水提液；將水提液與正己烷按體積1∶0.5比例混合、萃取；將萃取液在40℃下減壓蒸干，得到柑桔多甲氧基黃酮粗提物；?

(2)柑桔多甲氧基黃酮粗提物的柱層析純化；?

1)粗提物溶液的配制：將柑桔多甲氧基黃酮粗提物5g溶解于30～50％乙醇溶液500ml中，過濾后，備用；?

2)大孔樹脂裝柱：把大孔樹脂裝入層析柱中至柱高15～25cm；?

3)大孔樹脂的吸附：把粗提物溶液500ml，用蠕動泵以1～2.5ml/min流速流經(jīng)層析柱，并收集流出液；?

4)大孔樹脂的洗脫、收集與濃縮干燥：以60～100％的乙醇溶液500ml為洗?脫液，用蠕動泵以1ml/min流速流經(jīng)層析柱后，以每40ml為一管進行成分測定與收集，其中，將1至6～7管的洗脫液合并得洗脫液1，把其余洗脫液合并得洗脫液2；將洗脫液1與2分別減壓濃縮、回收乙醇，殘留物烘干、粉碎后，分別得到以川陳皮素為主的純化物1和以桔皮素為主的純化物2。?

所述的大孔樹脂為AB-8、D-101、NKA-9和DM312中的任選一種。?

本發(fā)明的有益效果是：?

(1)在粗提物的水提液中，因為多甲氧基黃酮是一種低極性的物質(zhì)，通過低極性正己烷的萃取后，使粗提物中川陳皮素和桔皮素兩種多甲氧基黃酮成分含量得到提高，其中，川陳皮素含30.8％，桔皮素含22.7％(見實施例1)；?

(2)本發(fā)明粗提物的純化工藝簡單易行，無需大型、貴重的設(shè)備，只需層析柱和一些常規(guī)設(shè)備就可進行；且其所用的大孔樹脂和溶劑乙醇都容易得到，對人體也較安全、可靠，并可重復(fù)多次利用，幾乎沒有排放；?

(3)本發(fā)明所選用的大孔樹脂都是對多甲氧基黃酮具有較高的吸附率與洗脫率，因此對柑桔多甲氧基黃酮粗提物具有較高純化效果，其總含量可達74.5-82.1％；總回收率可達45.9-68.6％(見表1)；?

表1各實施例的純化效果?