[發(fā)明專利]一種發(fā)酵生產(chǎn)利普司他汀的方法及其培養(yǎng)基組份

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110207208.7
• 申請日: 2011-07-23
• 公開（公告）號: CN102268466A
• 公開（公告）日: 2011-12-07
• 發(fā)明（設計）人: 趙志全;劉茂田
• 申請（專利權(quán)）人: 魯南新時代生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12P17/02
• 分類號: C12P17/02;C12R1/465
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種發(fā)酵生產(chǎn)利普司他汀的方法，包括毒三素鏈霉菌或其衍生物的斜面菌種的制備、搖瓶種子液的制備、種子液的制備以及發(fā)酵培養(yǎng)，其特征在于在發(fā)酵培養(yǎng)中，在發(fā)酵培養(yǎng)基中的甘油消耗殆盡后，開始流加補入亞油酸和亮氨酸溶液，其中亮氨酸溶液的濃度為70g/L，pH為11，二者的補料流速均為0.2～0.5g/L/h，單位g/L/h是克/升/小時；在發(fā)酵接種后至115小時，補料速度進行調(diào)整，補料速度在0.2～0.5g/L/h；在接種后至70小時，一次性補入滅菌的酵母提取物以及甘油，使培養(yǎng)基中酵母提取物以及甘油基質(zhì)濃度在5～10g/L的水平。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的發(fā)酵生產(chǎn)利普司他汀的方法，其特征在于所述菌種為毒三素鏈霉菌ACCC41038或其衍生物。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的發(fā)酵生產(chǎn)利普司他汀的方法，其特征在于它包括以下步驟：

a.斜面菌種的制備：將凍干的菌種用無菌水稀釋后涂布裝有固體培養(yǎng)基的斜面上，溫度28℃，濕度40～60％，培養(yǎng)8～10天，產(chǎn)孢后加無菌水制成孢子懸浮液；

b.搖瓶種子液制備：將斜面孢子接種搖瓶種子培養(yǎng)基，250rpm，溫度28℃，培養(yǎng)20～30小時；

c.種子液的制備：將步驟b中培養(yǎng)好的搖瓶種子接種到儲有種子培養(yǎng)基的種子罐中，接種量為種子培養(yǎng)基體積的0.1～0.8％，在28℃下通氣量0.8VVM～1.0VVM，單位VVM是體積/體積/分鐘，罐壓0.04～0.07MPa的條件下，培養(yǎng)20～40小時；

d.發(fā)酵培養(yǎng)：將步驟c中培養(yǎng)好的菌種接種到儲有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，接種種子液的量占發(fā)酵培養(yǎng)基和種子液體積的5～10％，在溫度為28℃，通氣量0.6VVM～1.1VVM，罐壓0.06～0.08MPa，發(fā)酵過程中pH控制在6.5～7.5范圍內(nèi)，培養(yǎng)160～190小時。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的發(fā)酵生產(chǎn)利普司他汀的方法，其特征在于所述的步驟a中固體培養(yǎng)基的成分和含量為：葡萄糖2～8g/L，麥芽提取物2～8g/L，酵母提取物4～10g/L，瓊脂10～20g/L，pH為6.9～7.4。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的發(fā)酵生產(chǎn)利普司他汀的方法，其特征在于所述的步驟b中搖瓶種子培養(yǎng)基成分和含量為：甘油10g/L，麥芽提取物10g/L，酵母提取提取物5g/L，脫脂豆粉20g/L，pH為6.0～6.5。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的發(fā)酵生產(chǎn)利普司他汀的方法，其特征在于所述的步驟c中種子培養(yǎng)基使用脫脂豆粉作為主要氮源。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的發(fā)酵生產(chǎn)利普司他汀的方法，其特征在于所述的步驟c中種子培養(yǎng)基成分和含量為：甘油10g/L，麥芽提取物10g/L，酵母提取物5g/L，脫脂豆粉20g/L，pH為6.0～6.5。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的發(fā)酵生產(chǎn)利普司他汀的方法，其特征在于所述的步驟d中發(fā)酵培養(yǎng)基使用甘油、豆油和脫脂豆粉為主要碳源或氮源。

9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的發(fā)酵生產(chǎn)利普司他汀的方法，其特征在于所述的步驟d中發(fā)酵培養(yǎng)基成分和含量為：甘油10～20g/L，脫脂豆粉20～40g/L，豆油10～20g/L，消泡劑2～5g/L，pH為6.7～7.0。

10.一種發(fā)酵生產(chǎn)利普司他汀的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于其成分和含量為：甘油10～20g/L，脫脂豆粉20～40g/L，豆油10～20g/L，消泡劑2～5g/L，pH為6.7～7.0。