[發明專利]一種溶菌酶分子印跡-量子點納米熒光探針的制備方法

有效

• 申請號: 201110204792.0
• 申請日: 2011-07-21
• 公開（公告）號: CN102313725A
• 公開（公告）日: 2012-01-11
• 發明（設計）人: 李文友;張衛;何錫文;張玉奎
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C09K11/88;C09K11/02
• 代理公司: 天津佳盟知識產權代理有限公司 12002
• 代理人: 侯力

技術領域

本發明涉及量子點熒光探針的制備技術，特別是一種溶菌酶分子印跡-量子點納米熒光探針的制備方法。

背景技術

量子點(quantum?dots，QD)是一種由II-VI族或III-V族元素組成的、能夠接受激發光產生熒光的半導體納米晶粒。量子點具有激發光譜寬且連續、發射光譜窄且對稱、發射波長可調、熒光量子產率高、光化學穩定性好等優越的熒光特性。近年來，量子點(半導體納米粒子)在生物、醫學領域的應用，極大的拓展了量子點研究的深度和廣度，成為生物、醫學領域最有生命力的發展方向之一。而且，量子點作為熒光探針在生物、醫學方面的研究中發揮巨大作用(M.Bruchez?Jr.，M.Moronne，P.Gin，S.Weiss，A.P.Alivisatos，Science，1998，281(5385)：2013-2016；W.C.W.Chan，S.Nie，Science，1998，281(5385)：2016-2018)。由于理想的熒光探針必須能夠與相應的目標分析物發生特異性的結合。因此發展對目標分析物具有特異性識別能力的熒光探針是主要研究內容之一。選擇合適的天然抗體對量子點進行標記，可以實現對目標物的分析。但由于天然抗體價格昂貴、提取過程繁瑣，而且穩定差，因此發展人工抗體技術(分子印跡技術)是解決這一問題的途徑之一。

分子印跡(又稱分子模板或分子烙印)技術是指制備對目標分子具有特異性識別能力的聚合物的技術(G.Valtakis，L.I.Andersson，R.Muller，K.Mosbach，Nature，1993，361(6413)：645-647；G.Wulff，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.，1995，34(17)：1812-1832)。由于印跡聚合物中空腔的空間結構以及空穴中功能基團的種類、數量和位點均與目標分子高度互補，因而它對目標分子的立體結構具有記憶功能。

基于分子印跡技術的量子點熒光探針的制備技術，則將分子印跡技術應用于量子點熒光探針的制備，目前，已被成功地應用于小分子的識別分析(C.I.Lin，A.K.Joseph，C.K.Chang，Y.D.Lee，J.Chromatogr.A，2004，1027(1-2)：259-262；C.I.Lin，A.K.Joseph，C.K.Chang，Y.D.Lee，Biosens.Bioelectron.，2004，20(1)：127-131；H.-F?Wang，Y.He，T.-R?Ji，X.-P.Yan，Anal.Chem.，2009，81(4)：1615-1621)。將量子點和蛋白質分子印跡聯合，結合分子印跡技術的高選擇性與量子點熒光檢測技術的高靈敏性，制備蛋白質分子印跡-量子點熒光探針可以應用于目標蛋白的選擇性識別及測定。

發明內容

本發明的目的在于針對上述技術分析，提供一種溶菌酶分子印跡-量子點納米熒光探針的制備方法，該量子點納米熒光探針，對模板分子的識別具有有較高的選擇性和靈敏性；且合成方法過程簡單，不同批次間重現性較好，在實際樣品中溶菌酶的選擇性識別和檢測中有著良好的應用前景。

本發明的技術方案：

一種溶菌酶分子印跡-量子點納米熒光探針的制備方法，是以碲化鎘量子點為載體，溶菌酶(N-乙酰胞壁質聚糖水解酶)為模板分子，結合分子印跡技術的選擇性和量子點的熒光特性合成的納米熒光探針，包括如下步驟：

1)將碲粉(Te)、NaBH₄與蒸餾水混合，在氮氣保護并攪拌的條件下進行還原反應制得NaHTe溶液，將制得的NaHTe溶液快速加入到巰基丙酸(MPA)的CdCl₂溶液中，用NaOH水溶液調節溶液的pH為9.0，然后沸水浴加熱所述溶液2h，即可制得碲化鎘量子點溶液；

2)將牛血清白蛋白溶于蒸餾水中，加入硼氫化鈉，攪拌一個小時，然后在70℃水浴中加熱30分鐘，得到變性的牛血清白蛋白(dBSA)溶液，將變性的牛血清蛋白溶液加入到碲化鎘量子點溶液中，磁力攪拌24小時，得到dBSA包覆的量子點溶液；

3)在dBSA包覆的量子點溶液中依次加入模板分子溶菌酶、功能單體3-氨丙基三乙氧基丙烷、交聯劑正硅酸乙酯和氨水，室溫下磁力攪拌12小時，通過溶膠凝膠水解聚合反應在量子點形成分子印跡層，即為探針；

4)用十二烷基硫酸鈉水溶液與探針混合，振蕩20-60分鐘，離心去除上清液，重新用上述十二烷基硫酸鈉溶液洗滌，重復此過程，直到用紫外分光光度計檢測模板分子洗凈為止，即可制得溶菌酶分子印跡-量子點納米熒光探針。