[發(fā)明專利]桑白皮藥材或桑白皮提取物的總生物堿類成分指紋圖譜的構(gòu)建方法及其質(zhì)量檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110204130.3
• 申請(qǐng)日: 2011-07-20
• 公開（公告）號(hào): CN102890125A
• 公開（公告）日: 2013-01-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 段震文;郭樹仁;薛嵐
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京北大維信生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/36
• 代理公司: 北京康信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11240
• 代理人: 吳貴明

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及中藥材的質(zhì)量檢測(cè)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種對(duì)桑白皮藥材或桑白皮提取物中總生物堿類成分的指紋圖譜構(gòu)建方法及檢測(cè)方法。?

背景技術(shù)

桑白皮為桑科植物桑Morus?alba?L.的干燥根皮，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，歷代本草均有收載。桑白皮性甘、寒，歸肺經(jīng)，具有瀉肺平喘、利水消腫功能，主治肺熱喘咳、水腫脹滿尿少、面目肌膚浮腫。桑白皮的主要化學(xué)成分包括：黃酮類化合物、哌啶型生物堿類化合物(以1-脫氧野尻霉素為代表)、香豆素類化合物、多糖類化合物等。桑白皮提取物由桑白皮藥材為原料制備而成：首先將桑白皮藥材切制或粉碎，用水提取，提取次數(shù)為1～3次，優(yōu)選提取3次，提取溫度為室溫至煮沸，優(yōu)選煮沸提取，溶劑量為藥材重量的10～30倍重量份，優(yōu)選20～30倍，獲得桑白皮藥材水提取液；然后提取液濃縮后離心，上清液過(guò)強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹脂，樹脂可選擇001*4、001*7、D61、D001cc等型號(hào)，優(yōu)選001*7(732型)，上柱流出液棄之，收集0.1～1N的氨水洗脫液，優(yōu)選用0.5N的氨水洗脫，洗脫液濃縮后，最終獲得桑白皮提取物，或經(jīng)過(guò)噴霧干燥、減壓或常壓干燥得到桑白皮提取物。桑白皮藥材及其提取物在民間常用于消炎、利尿、解熱、鎮(zhèn)咳、祛痰等。?

桑白皮所表現(xiàn)出來(lái)的多種功效吸引著眾多學(xué)者的目光，人們對(duì)其中的哌啶型生物堿類化合物開始了大量而深入的研究。20世紀(jì)70年代，日本學(xué)者Yoshiaki首次從桑白皮中分離得到一種生物堿Moranoline(1-脫氧野尻霉素，1-deoxynojirimycin，DNJ)，研究證實(shí)它能在小腸競(jìng)爭(zhēng)性抑制a-葡萄糖苷酶的活性，可用于治療糖尿病、肥胖癥、病毒感染等疾病。隨后，國(guó)內(nèi)外學(xué)者又從桑白皮中分離出多種生物堿，并確定了其分子結(jié)構(gòu)。研究人員將這些生物堿類化合物作用于糖尿病小鼠模型并充分證明，上述多種生物堿類化合物的降糖效果非常明顯。?

在對(duì)上述生物堿類活性成分的分離和提取過(guò)程中，人們發(fā)現(xiàn)由于DNJ及其他衍生物結(jié)構(gòu)中含有較多羥基，屬氮雜糖類，結(jié)構(gòu)中沒(méi)有苯環(huán)、雙鍵、羰基等發(fā)色基團(tuán)，在可見(jiàn)光區(qū)和紫外光區(qū)都沒(méi)有吸收，故很難用HPLC-UV法直接測(cè)定其含量。目前國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道多采用熒光試劑芴甲氧酰氯(FMOC-Cl)與DNJ發(fā)生柱前衍生化反應(yīng)后，用HPLC-FLU法進(jìn)行測(cè)定。FMOC-Cl是一種氨基酸衍生化試劑，主要用于伯胺和仲胺的衍生化，生成的衍生物具有穩(wěn)定的熒光強(qiáng)度。DNJ分子中因?yàn)榫哂兄侔方Y(jié)構(gòu)，所以可用FMOC-Cl進(jìn)行柱前衍生化，生成的衍生物采用HPLC-FLU法進(jìn)行測(cè)定。采用此方法對(duì)桑白皮藥材或桑白皮提取物進(jìn)行檢測(cè)，雖然可以有效地檢測(cè)出DNJ的含量，但是僅能檢測(cè)出這一單一成分，無(wú)法全面反映并控制桑白皮藥材以及桑白?皮提取物中總生物堿類活性成分的含量。?

楊文宇等在題為《桑樹總生物堿分析方法與提取方法的探討》一文中，公開了一種從桑葉、桑椹、桑白皮和桑枝中提取總生物堿的方法。該方法利用氯-鄰聯(lián)甲苯胺試劑作為顯色劑，利用薄層色譜分析以及分光光度法檢測(cè)總生物堿。這種方法雖然比較簡(jiǎn)便，對(duì)儀器的要求不高，但其分辨率較差，總生物堿中所含成分及含量均無(wú)法檢測(cè)出來(lái)，并不適合對(duì)桑白皮藥材以及桑白皮提取物進(jìn)行精確的質(zhì)量檢測(cè)。?

由此可見(jiàn)，為提高桑白皮藥材以及桑白皮提取物現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，亟待建立一種檢測(cè)精確度較高、可鑒別總生物堿類多種活性成分的檢測(cè)方法。?

發(fā)明內(nèi)容

為了解決桑白皮藥材或桑白皮提取物現(xiàn)有質(zhì)量檢測(cè)過(guò)程中僅能檢測(cè)出單一成分，無(wú)法全面反映桑白皮總生物堿類活性成分含量的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種桑白皮藥材或桑白皮提取物總生物堿類成分指紋圖譜的構(gòu)建方法。?

本發(fā)明提供的桑白皮藥材或桑白皮提取物總生物堿類成分指紋圖譜的構(gòu)建方法包括以下步驟：(a)制備桑白皮藥材溶液或桑白皮提取物溶液：以0.02mol/L的鹽酸溶液或水作為溶劑，將桑白皮藥材的粉末配制成桑白皮藥材溶液；或者以水作為溶劑，將桑白皮提取物的粉末配制成桑白皮提取物溶液；?