[發明專利]磁性共價固定化酶載體的制備方法

有效

• 申請號: 201110201473.4
• 申請日: 2011-07-19
• 公開（公告）號: CN102286452A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發明（設計）人: 于洪巍;王丹;王玨;王博;劉敏
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N11/08
• 分類號: C12N11/08
• 代理公司: 杭州裕陽專利事務所(普通合伙) 33221
• 代理人: 應圣義

1.磁性共價固定化酶載體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟a：制備油酸包裹的Fe₃O₄納米顆粒：

先通過氮氣排出三口瓶中的空氣，將FeCl₃?6H₂O、FeSO₄?7H₂O以摩爾比為2~5：0.2~2的比例混合并加到三口瓶中，加入包裹劑，將其放置于50-80℃恒溫攪拌池中攪拌0.5-2.5小時；加入堿性溶液，調節反應液pH值于9-13之間，繼續攪拌30分鐘；攪拌結束后，利用磁場分離出磁性顆粒；洗滌磁性顆粒，至洗滌液的pH?=?7，即可得到黑色的油酸包裹的Fe₃O₄納米粒子，用冷凍干燥機凍干或用烘箱烘干以備用；

步驟b：Fe₃O₄和烯酸酯的共聚反應：

通過氮氣排出反應器皿內的空氣，在25-55℃的溫度下，加入0.3-2g步驟a中制得的Fe₃O₄納米粒子、0.1g-0.3g?的分散劑和0.1-0.4g的引發劑，然后加入40ml醇水混合溶液，同時磁力攪拌，再加入0.2-5ml的烯酸酯類進行共聚反應，反應時間持續30-60分鐘；用乙酸乙酯和蒸餾水洗滌上述得到的聚合產物，用磁場分離出磁性顆粒，然后加入1%-8%的水合肼乙醇溶液，反應2小時后用蒸餾水洗滌并用冷凍干燥機凍干或用烘箱烘干以備用；

步驟c：載體的活化與固定化效率檢測：

稱取一定量的由步驟b制備的載體，在0℃的溫度下加入NaNO₂（0.3-1M）和HCl（0.3-1N）的混合液，反應5分鐘后蒸餾水洗滌得到活化的載體;?將活化的載體加入到酶溶液中，0℃下攪拌1小時，期間用考馬斯亮藍溶液測量酶溶液中酶的含量，根據酶溶液使用前后蛋白差值計算酶的裝載量。

2.根據權利要求1所述的磁性共價固定化酶載體的制備方法，其特征在于：所述的步驟a中的包裹劑為油酸鉀、二氧化硅、油酸鈉中的任一種。

3.根據權利要求1所述的磁性共價固定化酶載體的制備方法，其特征在于：所述的步驟a中的堿性溶液為氫氧化鈉溶液、氫氧化鉀溶液、氨水中的任一種。

4.根據權利要求1所述的磁性共價固定化酶載體的制備方法，其特征在于：所述的步驟b中的分散劑為聚乙烯醇、十二烷基硫酸鈉、聚乙二醇（PEG）中任一種。

5.根據權利要求1所述的磁性共價固定化酶載體的制備方法，其特征在于：所述的步驟b中的烯酸酯類包括丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙稀酸乙酯中的任一種。

6.根據權利要求1所述的磁性共價固定化酶載體的制備方法，其特征在于：所述的步驟b中的引發劑包括過硫酸鉀、過硫酸銨、過氧化苯甲酰中的任一種，其中過硫鹽可與亞鐵離子構成氧化還原劑，過氧化苯甲酰可與苯胺構成氧化還原劑。