[發明專利]一種甘菊繁殖方法

無效

• 申請號: 201110201439.7
• 申請日: 2011-07-19
• 公開（公告）號: CN102301952A
• 公開（公告）日: 2012-01-04
• 發明（設計）人: 戴思蘭;付建新
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所 11308
• 代理人: 葉凡

技術領域

本發明涉及一種植物組織培養的方法，特別涉及甘菊離體培養和植株再生的方法，屬于植物組織培養領域。

背景技術

甘菊(Chrysanthemum?lavandulifolium)又名巖香菊，甘野菊，為菊科菊屬甘菊系多年生草本植物，是菊花(Chrysanthemum×morifolium)起源的重要親本之一，具有較好的觀賞價值，屬于野生觀賞植物。其分布于我國多個省市，多生于海拔630-2300米的山坡、巖石、河谷、河岸、荒地以及黃土丘陵地區。

甘菊是一種較好的節水野生地被植物材料，具有抗逆性強、適用范圍廣、管理粗放等優點，適于山坡綠色、公路護坡、河堤種植，可防止水土流失；也可用于公園、庭院，增加景觀的野趣性；可與郊野綠地及植物配景，可形成艷麗的綴花草坪，可給園林增添許多生機。此外，甘菊為菊屬植物中的二倍體植物，倍性較低，是栽培菊花起源中參與起源且遺傳背景最為簡單的菊屬野生植物，適合用作菊科植物遺傳育種研究的模式植物。

目前人們已經針對甘菊做了不少研究工作，其中包括甘菊栽培繁殖技術，再生及轉化體系，花發育基因的克隆、表達及功能驗證和抗逆性等多方面的研究，這些研究為將甘菊作為菊科植物研究的模式植物奠定了基礎。例如劉占磊等人在2009年14期《安徽農業科學》上發表的甘菊遺傳轉化再生體系的建立，以甘菊無菌苗葉片為外植體，通過添加不同濃度的NAA和6-BA建立了甘菊遺傳轉化再生體系，在芽誘導培養基中添加0.1mg/L的NAA和0.1mg/L?6-BA時再生頻率最高，可達98％，其不定芽生根率可達100％，該研究為進行甘菊轉基因試驗打下了基礎。又如北京林業大學的丁焱等人在2005年《中國觀賞園藝研究進展》上發表的甘菊再生體系的建立，以甘菊無菌苗葉片為外植體，誘導植株再生，建立再生體系，結果表明甘菊種子用0.8％次氯酸鈉溶液20分鐘效果最好；切莖增殖用1/2MS+0.5％活性炭最好；誘導葉盤愈傷和分化采用MS+1mg/L6-BA+0.2mg/L?NAA最為迅速；生根培養中采用1/2MS+0.1％NAA效果更好，生根的小苗在溫室里生長良好。

穩定的再生體系和遺傳轉化體系是對甘菊進行轉基因工作和分子遺傳學分析的基礎。通常，一個穩定、高效的再生體系必須具備以下條件：(1)外植體的組織細胞具有再生愈傷組織和完整植株的能力；(2)具有較高的芽分化率；(3)易于離體培養，具有高度可重復性；(4)體細胞無性系統變異小。雖然對甘菊再生體系的研究較多，但是迄今為止，甘菊穩定的再生體系始終未獲得。現有技術中以甘菊的葉片作為外植體雖然能夠建立甘菊的再生體系，但其再生時間較長，愈傷組織誘導率以及不定芽的分化率低，再生體系不夠穩定，重復及再現性差，從而不利于甘菊的規模化、工廠化生產及培育。

發明內容

本發明的首要目的是針對上述現有技術存在的問題提供一種愈傷組織誘導率高、不定芽分化率高、生根率高及穩定的甘菊離體培養再生體系的建立方法。該方法可以在較短時間內形成大量優良的甘菊試管苗，可進行規模化、工廠化生產，可用于甘菊轉化體系研究，也可以用于分子育種研究。

為實現上述目的，本發明一方面提供一種甘菊繁殖的方法，包括以下步驟：

1)將甘菊種子接種于種子萌發培養基上進行無菌幼苗培養，萌生為無菌幼苗；

2)將無菌幼苗的下胚軸作為外植體，接種于愈傷組織誘導培養基上進行愈傷組織誘導培養，誘導生成愈傷組織；

3)將誘導生成的愈傷組織接種于不定芽分化培養基上進行不定芽的誘導分化培養，培養得到不定芽；

4)將不定芽接種于生根培養基上進行生根培養，誘導培養不定根，獲得生根苗；

5)將生根苗進行煉苗、移栽，即得。

其中，所述步驟1)中所述的種子萌發培養基是MS基本培養基+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L，pH值為6.18。

特別是，步驟1)中所述無菌幼苗為由種子萌發的子葉完全張開，真葉尚未展開的幼苗。

其中，所述無菌幼苗的下胚軸長度為12-17mm。

特別是，所述下胚軸為無菌幼苗子葉著生處到根尖的一端胚軸。

其中，所述步驟2)中所述愈傷組織誘導培養基是：MS基本培養基+2，4-二氯苯氧基乙酸0.5-1.5mg/L+6-芐氨基腺嘌呤0.1-1.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L，pH值為6.18。

特別是，步驟2)中所述2，4-二氯苯氧基乙酸優選為1mg/L，6-芐氨基腺嘌呤優選為0.5mg/L。