[發明專利]一種制備卡介菌的培養基原料馬鈴薯質量標準及質控方法

有效

• 申請號: 201110201369.5
• 申請日: 2011-07-19
• 公開（公告）號: CN102359920B
• 公開（公告）日: 2017-02-22
• 發明（設計）人: 辛秀;谷陟欣;袁莉;容明強;盧捷
• 申請（專利權）人: 九芝堂股份有限公司;湖南斯奇生物制藥有限公司
• 主分類號: G01N5/04
• 分類號: G01N5/04;G01N21/31;G01N21/33
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技術領域

本發明涉及一種制備卡介菌的培養基的原料馬鈴薯的質量標準和質控方法。

背景技術

在《中國藥典》2010年第三部中對卡介菌的培養基的規定是采用蘇通馬鈴薯培養基、改良蘇通綜合培養基或經批準的其他培養基。目前大部分企業所采用的是蘇通馬鈴薯培養基。培養特性項下說明，于37～39℃陪養時，卡介菌在蘇通馬鈴薯培養基發育成干皺成團略呈淺黃色的菌苔。

在企業的生產實踐中發現，不同批次的原料馬鈴薯制備的馬鈴薯培養基上所獲得的卡介菌質量不穩定，有的質地緊密，有的則枯黃稀疏，這些情況導致各批次間卡介菌的收率波動較大。

在將菌種接種到馬鈴薯培養基上接種滅菌后，可以看到有些馬鈴薯溶，有些土豆不溶。馬鈴薯溶與不溶的判定標準：去皮的馬鈴薯切成長方形片狀，長約8cm，寬約2.5cm，厚約lcm，制成馬鈴薯培養基。將馬鈴薯片放入異型試管中，加入配制好的培養基至略高于異型試管凹進部分，放入不銹鋼盒內連同接種鏟一起在0.11MPa、121℃條件下，滅菌30分鐘。在冷卻室放至常溫。如果滅菌冷卻后的馬鈴薯仍然保持完整長方形狀，則為不溶的馬鈴薯；如果有部分散落，溶于培養液中，則為溶的馬鈴薯。

經過觀察統計后發現，溶的土豆制成的培養基使得卡介菌生長情況更加良好，收獲的卡介菌更加致密有型，不易松散。收獲得到的卡介菌得率較高、穩定。

目前尚沒有任何單位或個人建立馬鈴薯培養基的原料質控方法，導致了馬鈴薯來源及標準無法統一，進而無法有效控制卡介菌的質量。發明人通過分析出馬鈴薯的有效成分變化、建立原料馬鈴薯質量標準和控制方法，使得生產得到的卡介菌的質量均一穩定，收率穩定可控。

發明內容

本發明目的是針對現有技術中存在的缺陷和問題，而提供用來制備卡介菌的培養基的原料馬鈴薯的質量標準和質控方法，以直鏈淀粉占總淀粉比例≥20.0%作為制備卡介菌的培養基的原料馬鈴薯的質控標準，保證所培養出的卡介菌得率和質量可控、均一穩定。

一種制備卡介菌的培養基的原料馬鈴薯的質量標準，其特征在于直鏈淀粉占總淀粉比例≥20.0%。

所述的馬鈴薯的質控方法，其特征在于包括如下步驟：

（一）總淀粉的含量測定：取切制好的大小合適的土豆塊片，用組織搗碎機搗碎，將適量試樣放于80目篩上沖洗，其纖維素等殘留于篩上，蛋白質、無機鹽、糖果、可溶性物質留于水中，稱為淀粉乳，而淀粉沉淀于下層，再過100目篩，將沉淀粉物用蒸餾水充分洗滌后，下層淀粉水量降至50%左右。上層混懸液用真空泵濾機吸濾，使含水量降至40%左右，經脫水后的淀粉放于干燥箱中進行干燥，干燥的溫度在≤60℃，干燥，冷卻，稱重，至2g連續兩次稱重的差異不超過5mg為止。

（二）直鏈淀粉的含量測定：?

（1）標準溶液配制

直鏈淀粉標準溶液：稱取100.0mg直鏈淀粉純品，放入100mL容量瓶中，加入1mol/LNaOH溶液10mL，在熱水中溶解后，取出，用蒸餾水定容至100mL，混勻，即為1mg/mL直鏈淀粉標準溶液。取標準溶液0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3mL分別置于50mL容量瓶中，加20～30mLH₂O，以0.1mol/LHCl調pH至3.5，加0.5mL碘試劑，定容，混勻，即得濃度為0、2、6、10、14、20、22、26μg/mL的標準溶液系列。

支鏈淀粉標準溶液：稱取100.0mg支鏈淀粉純品，放入100mL容量瓶中，加入1mol/LNaOH溶液10mL，在熱水中溶解后，取出，用蒸餾水定容至100mL，混勻，即為1mg/mL支鏈淀粉標準溶液。分別取1mg/mL溶液0、1、2、3、4、5mL，分別置于50mL容量瓶中，加20～30mLH₂O，以0.1mol/LHAC調pH至3.5，加0.5mL碘試劑，定容，混勻，得到0、20、40、60、80、100μg/mL的標準溶液系列。

（2）測定波長的選擇

各選一適宜濃度的直鏈淀粉(15μg/mL)和支鏈淀粉(60μg/mL)標準溶液，分別在雙波長紫外-可見分光光度計上進行400～1000nm光譜掃描，做出其光譜圖。

雙波長法測定波長的確定：用作圖法確定直鏈淀粉測定波長λ₁、參比波長λ₂。

結果：用作圖法確定直鏈淀粉測定波長λ₁=630nm、參比波長λ₂=486nm。