[發(fā)明專利]一種黃牛TMEM18基因的單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110201229.8
• 申請(qǐng)日: 2011-07-18
• 公開（公告）號(hào): CN102251038A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳宏;馬偉;劉棟;孫曉梅;馬云;藍(lán)賢勇;李愛民;胡沈榮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種黃牛TMEM18基因的單核苷酸多態(tài)性的檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：

以包含黃牛TMEM18基因的待測(cè)黃牛全基因組DNA為模板，以引物對(duì)1F為引物，PCR擴(kuò)增黃牛TMEM18基因，所述的引物對(duì)1F為，

正向上游引物：5’-GGCATGTTCATCTCCCTTGT-3’，

反向下游引物：5’-GCCCTGCACTGCTGTTTGTCC-3’，

用XspI限制性內(nèi)切酶消化PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，再對(duì)酶切后的片段進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果鑒定黃牛的TMEM18基因第3843位的單核苷酸多態(tài)性；

以包含黃牛TMEM18基因的待測(cè)黃牛全基因組DNA為模板，以引物對(duì)2F為引物，PCR擴(kuò)增黃牛TMEM18基因，所述的引物對(duì)2F為：

正向上游引物：5’-AGCAGCCTGCTGTCCATACACGC-3’，

反向下游引物：5’-GGGAGGGCCCTGCACTGCTGTTAG-3’，

用MluI限制性內(nèi)切酶消化PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，再對(duì)酶切后的片段進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果鑒定黃牛的TMEM18基因第3873位的堿基多態(tài)性。

2.如權(quán)利要求1所述的黃牛TMEM18基因的單核苷酸多態(tài)性的檢測(cè)方法，其特征在于，以引物對(duì)1F為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增的反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性5min；35個(gè)循環(huán)的94℃變性30s，66℃退火45s，72℃延伸45s；72℃延伸10min。

3.如權(quán)利要求1所述的黃牛TMEM18基因的單核苷酸多態(tài)性的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的XspI限制性內(nèi)切酶識(shí)別的酶切位點(diǎn)為第3843位所在的酶切位點(diǎn)。

4.如權(quán)利要求1所述的黃牛TMEM18基因的單核苷酸多態(tài)性的檢測(cè)方法，其特征在于，XspI酶切后所用的瓊脂糖凝膠的質(zhì)量濃度為1.5％。

5.如權(quán)利要求1所述的黃牛TMEM18基因的單核苷酸多態(tài)性的檢測(cè)方法，其特征在于，以引物對(duì)2F為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增的反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性5min；30個(gè)循環(huán)的94℃變性30s，68℃退火30s，72℃延伸30s；72℃延伸10min。

6.如權(quán)利要求1所述的黃牛TMEM18基因的單核苷酸多態(tài)性的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的MluI限制性內(nèi)切酶識(shí)別的酶切位點(diǎn)為第3873位所在的酶切位點(diǎn)。

7.如權(quán)利要求1所述的黃牛TMEM18基因的單核苷酸多態(tài)性的檢測(cè)方法，其特征在于，MluI酶切后所用的瓊脂糖凝膠的質(zhì)量濃度為3.0％。

8.如權(quán)利要求1所述的黃牛TMEM18基因的單核苷酸多態(tài)性的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的黃牛TMEM18基因第3843位的單核苷酸多態(tài)性為：AA基因型表現(xiàn)為247和165bp的條帶；GG基因型表現(xiàn)為412bp的條帶；AG基因型表現(xiàn)為412、247和165bp的條帶。

9.如權(quán)利要求1所述的黃牛TMEM18基因的單核苷酸多態(tài)性的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的黃牛TMEM18基因第3873位的單核苷酸多態(tài)性為：AA基因型表現(xiàn)為160bp條帶；GG基因型表現(xiàn)為143和17bp條帶；AG基因型表現(xiàn)為160、143和17bp條帶。