[發明專利]家蠅抗藥性檢測試劑盒及其專用引物

無效

• 申請號: 201110197109.5
• 申請日: 2011-07-14
• 公開（公告）號: CN102242217A
• 公開（公告）日: 2011-11-16
• 發明（設計）人: 李春曉;趙彤言;董言德;汪中明;郭曉霞;劉美德;張映梅;邢丹
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種檢測家蠅中kdr基因突變位點的引物，由引物組A和引物組B組成：

所述引物組A包括引物2和引物3，所述引物2和所述引物3的核苷酸序列分別為序列表中序列2和序列表中序列3；

所述引物組B包括引物2和引物4，所述引物2和所述引物4的核苷酸序列分別為序列表中序列2和序列表中序列4。

2.根據權利要求1所述的引物，其特征在于：

所述引物組A還包括引物1，所述引物組B還包括引物1，所述引物1的核苷酸序列為序列表中序列1。

3.根據權利要求1或2所述的引物，其特征在于：

所述引物組A和所述引物組B為獨立包裝；

所述引物組A中所述引物1、引物2和引物3的質量比為1∶2∶1；

所述引物組B中所述引物1、引物2和引物4的質量比為1∶2∶1；

所述突變位點為L1014F。

4.一種檢測家蠅中kdr基因突變位點的PCR試劑，由試劑A和試劑B組成；

所述試劑A由所述引物組A和PCR緩沖液組成；

所述試劑B由所述引物組B和PCR緩沖液組成；

所述各引物組中各引物在對應的所述PCR試劑中的濃度均為0.4uM；

所述突變位點為L1014F。

5.一種制備檢測家蠅中kdr基因突變位點的試劑的方法，包括如下步驟：

1)分別將權利要求1-3中任一所述的引物中的所述引物組A和所述引物組B進行獨立包裝，得到獨立包裝引物組A和獨立包裝引物組B；

2)再將步驟1)得到的獨立包裝引物組A和步驟1)得到的獨立包裝引物組B進行包裝，得到試劑；

所述突變位點為L1014F。

6.由權利要求5所述方法制備得到的試劑。

7.一種檢測家蠅中kdr基因突變位點的試劑盒，為如下1)或2)：

1)所示的試劑盒由試劑盒A和試劑盒B組成；

所述試劑盒A為含有權利要求4所述PCR試劑中的試劑A的試劑盒；

所述試劑盒B為含有權利要求4所述PCR試劑中的試劑B的試劑盒；

2)所示的試劑盒為含有權利要求6所述的試劑的試劑盒；

所述突變位點為L1014F。

8.權利要求1-3中任一所述引物或權利要求4或6所述試劑或權利要求7所述試劑盒在檢測家蠅中kdr基因突變位點、檢測家蠅抗藥性或制備檢測家蠅抗藥性產品中的應用；所述突變位點為L1014F，所述抗藥性為抗菊酯類藥物；所述菊酯類藥物具體為溴氰菊酯、Es-生物丙烯菊酯、氯菊酯或高效氯氰菊酯。

9.一種檢測待測家蠅中kdr基因突變位點的方法，包括如下步驟：

用權利要求1-3中任一所述的引物或權利要求4或6所述試劑或權利要求7所述試劑盒中的所述引物組A中的所述引物2和所述引物3作為引物對A和用所述引物組B中的所述引物2、所述引物4作為引物對B分別對待測家蠅進行PCR擴增，得到PCR擴增產物；檢測各組引物擴增得到的產物，

若所述引物對B擴增得到大小為257bp產物2，則所述待測家蠅的kdr基因的突變位點為L1014F；

所述257bp產物2的核苷酸序列為序列表中的序列7。

10.一種檢測待測家蠅中kdr基因型的方法，包括如下步驟：

用權利要求1-3中任一所述的引物或權利要求4或6所述試劑或權利要求7所述試劑盒中的所述引物組A中的所述引物2和所述引物3作為引物對A和用所述引物組B中的所述引物2、所述引物4作為引物對B分別對待測家蠅進行PCR擴增，得到PCR擴增產物；檢測各組引物擴增得到的產物，

若所述引物對B擴增得到大小為257bp產物2，且所述引物對A未擴增得到大小為257bp產物1，則所述kdr基因為含有突變位點L1014F的純合型基因；

若所述引物對B擴增得到大小為257bp產物2，且所述引物對A擴增得到大小為257bp產物1，則所述kdr基因為含有突變位點L1014F的雜合型基因；

若所述引物對B未擴增得到大小為257bp產物2，且所述引物對A擴增得到大小為257bp產物1，則所述待測家蠅的kdr基因為不含突變位點L1014F的純合型基因；

所述257bp產物1的核苷酸序列為序列表中的序列6

所述257bp產物2的核苷酸序列為序列表中的序列7；

所述PCR擴增中，以待測家蠅的基因組DNA為模板；

所述PCR擴增的退火溫度為62-65℃，所述PCR擴增的退火溫度具體為65℃；

所述檢測PCR擴增產物的方法為瓊脂糖凝膠電泳或測序。