[發明專利]一種3群霍亂弧菌熒光PCR檢測試劑盒及系統鑒定方法

有效

• 申請號: 201110196918.4
• 申請日: 2011-07-14
• 公開（公告）號: CN102242216A
• 公開（公告）日: 2011-11-16
• 發明（設計）人: 羅蕓;葉菊蓮;張政;金大智
• 申請（專利權）人: 浙江省疾病預防控制中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/63
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

1.一種3群霍亂弧菌熒光PCR檢測試劑盒，主要包括外膜蛋白基因(ompW)特異性引物和熒光探針、PCR緩沖液、脫氧三磷酸核苷混合物和DNA聚合酶，其特征在于所述特異性引物和熒光探針如下：

ompW上游引物：5′-TCCTCAACGCTTCTGTGTGGTAT-3′

ompW下游引物：5′-ATTGATTTCAACATCCGTGGATT-3′

ompW熒光探針：5′-FAM-TGA?AAC?AAC?GGC?AAC?CTA?CAA?AGCAGG-BHQ1-3，其中FAM為熒光報告基團，BHQ1為熒光淬滅基團。

2.如權利要求1所述的熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于所述試劑盒還包括ompW標準品，所述ompW標準品序列如下：cttgac?gactcatggggacttgctgc?taacgttggc?tttgattata?tgctcaatga?tagctggttc?ctcaacgctt?ctgtgtggtatgccaatatt?gaaacaacgg?caacctacaa?agcaggtgca?gatgccaaat?ccacggatgttgaaatcaat?ccttgggtat?ttatgatcgc?gggtgg。

3.如權利要求1或2所述的熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于所述試劑盒還包括毒素表達調控蛋白基因(toxR)特異性引物和熒光探針以及溶血素基因(hlyA)特異性引物和熒光探針，所述特異性引物和熒光探針如下：

toxR上游引物：5′-GATTCGACAAAGTCCCCACAA-3′

toxR下游引物：5′-TCGGGCGATCAATTGGTAA-3′

toxR熒光探針：5′-HEX-CGTCAAAACGGTTCCGAAACGCG-BHQ?1-3′

hlyA上游引物：5′-AGTGGTCAACCGATGCGATT-3′

hlyA下游引物：5′-TTCAGGATCTGCGCTTTATTGTT-3′

hlyA熒光探針：5′-ROX-CCC?AAG?ATT?ATC?GCT?TCG?TGT?TTA?ACGCA-BHQ2-3′

其中HEX和ROX為熒光報告基團，BHQ1和BHQ2為熒光淬滅基團。

4.如權利要求3所述的熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于所述試劑盒還包括toxR標準品和hlyA標準品，

所述toxR標準品序列如下：ttgcatgact?ttgtttggcg?agagcaaggt?tttgaagtcgatgattccag?cttaacccaa?gccatttcga?ctctgcgcaa?aatgctcaaa?gattcgacaaagtccccaca?atacgtcaaa?acggttccga?aacgcggtta?ccaattgatc?gcccgagtggaaacggttga?agaagagatg?gctcgcgaaa?gcgaagctgc?tcatgacatc?tctcagccagaatctgtcaa?tgaatacgca?gagtcaagca?gtgtgcct；

所述hlyA標準品序列如下：agatgatgaca?gcacgggagc?cggcattcat?ctgaatgatcaactcggtta?tcgtcagttt?ggagccagtt?atacgacgtta?gatgcctattt?ccgtgagtggtcaaccgatgcg?attgcccaag?attatcgcttc?gtgtttaacg?catcgaacaat?aaagcgcagatcctgaaaacc?tttcctgtcg?ataacattaa?cgagaaattt?gagcgcaaag?aggtttcagg?ttttgagc。

5.權利要求1所述的熒光PCR檢測試劑盒在3群霍亂弧菌系統鑒定中的應用。