[發(fā)明專利]一種抗煙草青枯病的枯草芽孢桿菌菌劑的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110195718.7
• 申請日: 2011-07-13
• 公開（公告）號: CN102258059A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發(fā)明（設計）人: 呂玉成;薛明政;史蘭東
• 申請（專利權）人: 山東玉成生化農(nóng)藥有限公司
• 主分類號: A01N63/02
• 分類號: A01N63/02;A01P1/00;C12N1/20;C12R1/125
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 李江

1.一種抗煙草青枯病的枯草芽孢桿菌菌劑的制備方法，其特征在于：由以下方法制備而成：

（1）菌種活化：對保藏的枯草芽孢桿菌進行活化培養(yǎng)至芽孢脫落；

（2）搖床擴大培養(yǎng)：將活化后的枯草芽孢桿菌接種到液體培養(yǎng)基中進行搖床擴大培養(yǎng)，初始pH值為7.0～7.2，培養(yǎng)溫度為30℃，搖床轉(zhuǎn)速為200rpm，至15～20％的芽孢脫落為止；

（3）種子罐擴大培養(yǎng)：在無菌操作下，將搖床擴大培養(yǎng)得到的菌液接入到含有種子罐培養(yǎng)基的種子罐內(nèi)，初期通風比1︰0.25，后期通風比1︰1；同時，控制發(fā)酵液的pH值為6.9～7.3，溫度為32℃，發(fā)酵罐的攪拌轉(zhuǎn)速為80～220?rpm；至芽孢桿菌進入對數(shù)生長期的后期；

（4）發(fā)酵罐發(fā)酵：將培養(yǎng)至指數(shù)生長期后期的種子罐菌液在無菌條件下轉(zhuǎn)入裝有發(fā)酵罐培養(yǎng)基的發(fā)酵罐，罐裝量為發(fā)酵罐容積的70％，進行發(fā)酵罐的前期培養(yǎng)和后期培養(yǎng)；

（5）菌劑的制備：發(fā)酵罐發(fā)酵結束后，降低發(fā)酵通風比至1︰0.08，維持發(fā)酵罐壓力0.02MPa，降低攪拌轉(zhuǎn)速至20rpm，對發(fā)酵液降溫至10℃以下；然后通過膜過濾濃縮處理，將發(fā)酵液體積濃縮至原來的1/5～1/8；再添加調(diào)配緩沖保護劑，混合均勻后，對濃縮后的發(fā)酵液進行噴霧干燥處理，得到菌劑產(chǎn)品。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種抗煙草青枯病的枯草芽孢桿菌菌劑的制備方法，其特征在于：所述的步驟（1）活化所用的培養(yǎng)基配方為：牛肉胨3g，蛋白胨5g，瓊脂16g，水定容至1000ml。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種抗煙草青枯病的枯草芽孢桿菌菌劑的制備方法，其特征在于：所述的步驟（2）的液體培養(yǎng)基的配方為：玉米粉6.5g，葡萄糖?2.5g，豆餅粉10.1g，魚粉2.5g，CaCO₃?3.5g，(NH₄)₂SO_4?0.5g，K₂HPO_4?0.15g，MgSO₄·7H₂O?0.1g，MnSO₄·H₂O?0.1g，水定容至500ml。

4.根據(jù)權利要求1所述的一種抗煙草青枯病的枯草芽孢桿菌菌劑的制備方法，其特征在于：所述的步驟（3）的種子罐培養(yǎng)基配方為：玉米粉12.98g，葡萄糖5g，豆餅粉20.1g，魚粉5g，CaCO₃?6.90g，(NH₄)₂SO₄?1g，K₂HPO₄?0.3g，MgSO₄·7H₂O?0.2g，MnSO₄·H₂O?0.2g，水定容至1000ml。

5.根據(jù)權利要求1所述的一種抗煙草青枯病的枯草芽孢桿菌菌劑的制備方法，其特征在于：所述的步驟（4）的發(fā)酵罐培養(yǎng)基的配方為：玉米粉12.98g，葡萄糖5g，豆餅粉20.1g，魚粉5g，CaCO₃?6.90g，(NH₄)₂SO₄?1g，K₂HPO₄?0.3g，MgSO₄·7H₂O?0.2g，MnSO₄·H₂O?0.2g，水定容至1000ml。

6.根據(jù)權利要求1所述的一種抗煙草青枯病的枯草芽孢桿菌菌劑的制備方法，其特征在于：所述的步驟（4）的發(fā)酵罐前期培養(yǎng)方法為：對接入種子液的發(fā)酵罐，溫度28～32℃，pH6.9～7.3，通風量1︰0．25～1.1，攪拌轉(zhuǎn)速150～180?rpm；保持發(fā)酵液總糖含量0.35～0.6%、總氮含量30～45ng/ml，培養(yǎng)至芽孢形成率55～65%，進入發(fā)酵后期。

7.根據(jù)權利要求1所述的一種抗煙草青枯病的枯草芽孢桿菌菌劑的制備方法，其特征在于：所述的步驟（4）的發(fā)酵罐后期培養(yǎng)方法為：使用有機氮源調(diào)節(jié)發(fā)酵液的總氮含量，控制總氮含量在40ng/ml以上，培養(yǎng)至芽孢形成率80%以上、pH值7.7以上，后期發(fā)酵結束。