[發明專利]羊胎素蛋白質及其制備方法

有效

• 申請號: 201110193927.8
• 申請日: 2011-07-12
• 公開（公告）號: CN102329841A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發明（設計）人: 姜雪琪;姜艷
• 申請（專利權）人: 湖州康海斯生物科技有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K4/12;C07K14/47;C07K1/16
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務所有限公司 33214
• 代理人: 王從友

技術領域

本發明涉及一種羊胚胎及羊胎盤生物制品及其制備方法。

背景技術

我國利用動物的各種器官、組織及代謝產物進行治病、防病和醫療保健的歷史悠久，現存完整的藥學典籍—?—?《神農本草論》就有牛黃、犀角、鹿茸、阿膠等多種動物藥物的記載。說明了我國在制藥技術上早已利用動物藥物進行加工、提取、精制而成較為純凈的藥劑。

胎盤(Placenta)又名“紫河車”，為常用中藥，現代醫學研究表明：胎盤含有多種免疫球蛋白、活性肽等生物活性物質及氨基酸、礦物質等成分(統稱活細胞素)，是一種機體免疫功能的調節劑和營養、美容保健品。科學家對多種動物胎盤進行對比實驗后發現，羊胎盤的細胞組織結構與人胎盤最為相似，可望成為同人類胎盤具有同等養生價值的替代物。

近年來，在國內外又相繼出現了動物胎盤水解液和胎盤浸提液二種新型羊胎盤生物制品，因其獨特的效能，已引起人們的注目。但我們認為上述二種制劑各有弊端，前者在水解過程中將胎盤中的天然活性物質破壞，失去利用胎盤的意義；后者雖然有多種天然活性物質，但多肽及氨基酸含量甚微，如能使二者融為一體，既保留胎盤中的天然活性物質，又增加其多肽及氨基酸含量。無疑這在羊胎及羊胎盤生物制品開發研究中是一個新的突破。

發明內容

為了解決上述的技術問題，本發明的一個目的是提供一種羊胎素蛋白質的制備方法。本發明的另外一個目的是提供上述的羊胎素蛋白質。

為了實現上述的第一個目的，本發明采用了以下的技術方案：

一種羊胎素氨基酸的制備方法，該方法包括以下的步驟:

1）羊胚胎及羊胎盤原料前處理：取羊胚胎及羊胎盤為原料，清洗，去除雜質，0～5℃低溫下粉碎成粗粉；

2）羊胚胎及羊胎盤超微粉碎、細胞破壁：將羊胚胎及羊胎盤粗粉低溫-40℃～-50℃冷凍1～3h后，-30～-10℃超微粉碎，細胞破壁，達到0.1～10μm粒度；

3）羊胚胎及羊胎盤的提取和酶解：細胞破壁后的羊胚胎及羊胎盤漿液加3～8倍蒸餾水溫浸提取后過濾得濾液A和沉淀A，沉淀A采用蛋白酶酶解后抽濾得水解液B，合并濾液A和水解液B，得羊胚胎及羊胎盤素的精制羊胎素；

4）采用葡聚糖凝膠層析法，根據分子量大小對上述步驟3）中得到的羊胎及羊胎盤素原液進行以下的分級精制：

①分離氨基酸，分子量<700的多肽：羊胚胎及羊胎盤素的精制羊胎素上樣，固定相Sephadex?G-10，依次用水，2%NaCl溶液洗脫，收集不同組分；

②分離分子量1000-5000的多肽：①中水洗脫液上樣，固定相Sephadex?G-25，依次用水，0%-2%NaCl溶液梯度洗脫，收集不同組分；

③分離分子量5000-30000的多肽：②中水洗脫液上樣，固定相Sephadex?G-50，依次用水，0%-2%NaCl溶液梯度洗脫，收集不同組分；

④分離分子量30000-150000的蛋白質：③中水洗脫液上樣，固定相Sephadex?G-100，依次用水，0%-2%NaCl溶液梯度洗脫，收集不同組分；

⑤分離分子量150000-600000的蛋白質：④中水洗脫液上樣，固定相Sephadex?G-200，依次用水，0%-2%NaCl溶液梯度洗脫，收集不同組分。

作為優選，上述的步驟1）中以2～3個月齡的羊胚胎及羊胎盤為原料。

作為優選，上述的步驟3）中蛋白酶采用木瓜蛋白酶與胰蛋白酶中一種或兩種混合。

作為優選，上述的步驟3）中蛋白酶的使用量為沉淀A重量的0.1%～2%。

作為再優選，上述的步驟3）中蛋白酶的使用量為沉淀A重量的0.3%～1%。

作為優選，上述的步驟3）中蛋白酶采用木瓜蛋白酶與胰蛋白酶兩種混合，酶解反應的溫度為40～50℃，pH為7.0～8.0，木瓜蛋白酶與胰蛋白酶的酶配比1：0.5～2。

作為再優選，步驟3）中酶解反應的溫度為45℃，pH為7.5，木瓜蛋白酶與胰蛋白酶的酶配比1：1。

為了實現上述的第二個目的，本發明還提供了上述的任意一項技術方案制備得到的羊胎素蛋白質。

本發明由于采用了上述的技術方案，該技術的生產加工過程既能充分提取羊胎及羊胎盤中的有效成分，使羊胎及羊胎盤的活性物質得到最大限度的保留，又便于人體全面吸收，工藝先進、合理，質量可控。采用上述方法制得羊胎素蛋白質，具有以下的作用：

1、調節女性內分泌，全面有效地改善人體皮膚狀況，美容養顏，美白肌膚，增強皮膚彈性、去黑斑，防止皺紋、妊娠紋及延緩衰老；