[發(fā)明專利]羊胎素蛋白質(zhì)及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110193927.8
• 申請日: 2011-07-12
• 公開（公告）號: CN102329841A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姜雪琪;姜艷
• 申請（專利權(quán)）人: 湖州康海斯生物科技有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K4/12;C07K14/47;C07K1/16
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務(wù)所有限公司 33214
• 代理人: 王從友

1.羊胎素蛋白質(zhì)的制備方法，其特征在于該方法包括以下的步驟:

1）羊胚胎及羊胎盤原料前處理：取羊胚胎及羊胎盤為原料，清洗，去除雜質(zhì)，0～5℃低溫下粉碎成粗粉；

2）羊胚胎及羊胎盤超微粉碎、細(xì)胞破壁：將羊胚胎及羊胎盤粗粉低溫-40℃～-50℃冷凍1～3h后，-30～-10℃超微粉碎，細(xì)胞破壁，達(dá)到0.1～10μm粒度；

3）羊胚胎及羊胎盤的提取和酶解：細(xì)胞破壁后的羊胚胎及羊胎盤漿液加3～10倍蒸餾水溫浸提取后過濾得濾液A和沉淀A，沉淀A采用蛋白酶酶解后抽濾得水解液B，合并濾液A和水解液B，得羊胚胎及羊胎盤素的精制羊胎素；

4）采用葡聚糖凝膠層析法，根據(jù)分子量大小對上述步驟3）中得到的羊胎及羊胎盤素原液進(jìn)行以下的分級精制：

①分離氨基酸，分子量<700的多肽：羊胚胎及羊胎盤素的精制羊胎素上樣，固定相Sephadex?G-10，依次用水，2%NaCl溶液洗脫，收集不同組分；

②分離分子量1000-5000的多肽：①中水洗脫液上樣，固定相Sephadex?G-25，依次用水，0%-2%NaCl溶液梯度洗脫，收集不同組分；

③分離分子量5000-30000的多肽：②中水洗脫液上樣，固定相Sephadex?G-50，依次用水，0%-2%NaCl溶液梯度洗脫，收集不同組分；

④分離分子量30000-150000的蛋白質(zhì)：③中水洗脫液上樣，固定相Sephadex?G-100，依次用水，0%-2%NaCl溶液梯度洗脫，收集不同組分；

⑤分離分子量150000-600000的蛋白質(zhì)：④中水洗脫液上樣，固定相Sephadex?G-200，依次用水，0%-2%NaCl溶液梯度洗脫，收集不同組分。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羊胎素蛋白質(zhì)的制備方法，其特征在于：步驟1）中以2～3個(gè)月齡的羊胚胎及羊胎盤為原料。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羊胎素蛋白質(zhì)的制備方法，其特征在于：步驟3）中蛋白酶采用木瓜蛋白酶與胰蛋白酶中一種或兩種混合。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羊胎素蛋白質(zhì)的制備方法，其特征在于：步驟3）中蛋白酶的使用量為沉淀A重量的0.1%～2%。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的羊胎素蛋白質(zhì)的制備方法，其特征在于：步驟3）中蛋白酶的使用量為沉淀A重量的0.3%～1%。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4或5所述的羊胎素蛋白質(zhì)的制備方法，其特征在于：步驟3）中蛋白酶采用木瓜蛋白酶與胰蛋白酶兩種混合，酶解反應(yīng)的溫度為40～50℃，pH為7.0～8.0，木瓜蛋白酶與胰蛋白酶的酶配比1：0.5～2。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的羊胎素蛋白質(zhì)的制備方法，其特征在于：步驟3）中酶解反應(yīng)的溫度為45℃，pH為7.5，木瓜蛋白酶與胰蛋白酶的酶配比1：1。

8.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4或5所述的方法制備得到的羊胎素蛋白質(zhì)。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法制備得到的羊胎素蛋白質(zhì)。