[發(fā)明專利]一種牛奶或乳粉中植物源摻加物的一重/雙重PCR檢測(cè)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110189165.4
• 申請(qǐng)日: 2011-07-07
• 公開（公告）號(hào): CN102367472A
• 公開（公告）日: 2012-03-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬鶯;徐偉麗;李啟明;仇麗亞;汪家琦
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 哈爾濱工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種牛奶或乳粉中植物源摻加物的一重/雙重PCR檢測(cè)方法，其特征在于，首先對(duì)待測(cè)產(chǎn)品的DNA模板進(jìn)行提取，然后采用牛特異性引物和植物源特異性引物對(duì)提取的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，同時(shí)對(duì)牛源DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增做為陰性對(duì)照組，對(duì)植物源DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增做為陽(yáng)性對(duì)照組，然后對(duì)所有擴(kuò)增產(chǎn)物分別進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析；最后根據(jù)被測(cè)產(chǎn)品孔出現(xiàn)的電泳帶與陽(yáng)性對(duì)照組和陰性對(duì)照組進(jìn)行比對(duì)，即可判定產(chǎn)品中是否添加了植物源摻加物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的牛奶或乳粉中植物源摻加物的一重/雙重PCR檢測(cè)方法，其特征在于，牛特異性引物1和植物特異性引物2具有的核苷酸序列為：引物1-1?5′-GCC?ATATAC?TCT?CCT?TGG?TGA?CA-3′；引物1-2?5′-GTA?GGC?TTG?GGA?ATA?GTA?CGA-3′；引物2-1?5′-AAT?CTT?CTA?CTG?GTA?CAT?GGA?C-3′；引物2-2?5′-TCA?TCA?TCT?TTG?GTA?AAATCA?AG-3′。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的牛奶或乳粉中植物源摻加物的一重/雙重PCR檢測(cè)方法，其特征在于，PCR反應(yīng)所用試劑還包括Taq酶、dNTP、10×緩沖液、MgCl₂和滅菌水。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的牛奶或乳粉中植物源摻加物的一重/雙重PCR檢測(cè)方法，其特征在于，所述植物源包括豆?jié){、豆粉、大豆分離蛋白或米湯。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的牛奶或乳粉中植物源摻加物的一重/雙重PCR檢測(cè)方法，其特征在于，所述的PCR引物濃度為0.1-0.4μmol/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的牛奶或乳粉中植物源摻加物的一重/雙重PCR檢測(cè)方法，其特征在于，所述的PCR引物濃度為0.2μmol/L。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的牛奶或乳粉中植物源摻加物的一重/雙重PCR檢測(cè)方法，其特征在于，所述PCR反應(yīng)循環(huán)條件為預(yù)變性92～96℃3～8min；變性92～96℃20～40s，退火52～60℃20～40s，延伸72℃30～120s，共31～35個(gè)循環(huán)，最后延伸72℃3～10min。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的牛奶或乳粉中植物源摻加物的一重/雙重PCR檢測(cè)方法，其特征在于，所述PCR反應(yīng)循環(huán)條件為預(yù)變性94℃4min；變性94℃30s，退火54℃30s，延伸72℃60s，共35個(gè)循環(huán)，最后延伸72℃7min。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的牛奶或乳粉中植物源摻加物的一重/雙重PCR檢測(cè)方法，其特征在于，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析采用的瓊脂糖凝膠的質(zhì)量濃度為1.5～2.0％。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的牛奶或乳粉中植物源摻加物的一重/雙重PCR檢測(cè)方法，其特征在于，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析采用的瓊脂糖凝膠的質(zhì)量濃度為1.7％。