[發(fā)明專利]AGR2阻斷抗體及其用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110186469.5
• 申請日: 2011-07-05
• 公開（公告）號: CN102268089A
• 公開（公告）日: 2011-12-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李大偉;武正華;李坤;朱奇;婁昊川;郭昊
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;C12P21/08;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 上海交達專利事務(wù)所 31201
• 代理人: 王毓理

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種遺傳免疫及分子生物技術(shù)領(lǐng)域的單克隆抗體，具體涉及一種AGR2阻斷抗體及其用途。?

背景技術(shù)

Anterior?gradient-2(AGR2)最早在雌激素受體表達的人乳腺癌細(xì)胞株中通過differential篩選發(fā)現(xiàn)(Kuang，W.W.，et?al.，Nucleic?Acids?Res，1998.26(4)：p.1116-23.)，隨后得到全長cDNA克隆，比較后發(fā)現(xiàn)與蟾蜍XA-2發(fā)育相關(guān)蛋白同源并命名為hAG-2(Thompson，D.A.and?R.J.Weigel，hAG-2，Biochem?Biophys?Res?Commun，1998.251(1)：p.111-6.)。AGR2與蛋白二硫化物異構(gòu)酶(PDI)有較高的同源性(Persson，S.，et?al..Mol?Phylogenet?Evol?200536(3)：p.734-40.)，并且具有PDI活性(Park，S.W.，et?al.，PNAS，2009.106(17)：p.6950-5.)。AGR2有PDI的活性位點“CXXS”，這與正常PDI的位點“CXXC”有所區(qū)別，通過其他PDI蛋白的研究表明“CXXS”活性位點具有重拍二硫鍵的功能，但缺失二硫鍵的合成功能。這也就意味著AGR2有擾亂正常細(xì)胞生長的功能，而缺失回復(fù)其功能的能力(Anelli，T.，et?al.，EMBO?J，2002.21(4)：p.835-44.Anelli，T.，et?al.，EMBO?J，2003.22(19)：p.5015-22.)。?

AGR2是原發(fā)性和繼發(fā)性腫瘤的標(biāo)識蛋白，并且可在腫瘤患者循環(huán)系統(tǒng)中檢出，并且與腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。AGR2具有促進乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化和遷移的作用(Liu?D，et?al.CancerRes，2005，65(9)：3796-3805.)。AGR2可以增加胰腺癌細(xì)胞的侵襲能力，從而促進腫瘤轉(zhuǎn)移(Ramachandran?V，et?al.Cancer?Res，2008，68(19)：7811-7818.)。AGR2在前列腺癌的轉(zhuǎn)移中起到重要作用(Zhang?Y，et?al.Cancer?Res，2010，70(1)：240-248.)。直到2010年，Kathryn等提到了用AGR2多克隆抗體可抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(Kathryn?E?Vanderlaag，et?al.breast?canser，2010，12.)。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，提供一種AGR2阻斷抗體及其用途，通過雜交瘤細(xì)胞株18A4制備得到單克隆抗體，可特異結(jié)合AGR2活性結(jié)構(gòu)域并能阻斷AGR2功能。?

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：?

本發(fā)明涉及一種特異性結(jié)合AGR2蛋白二硫鍵異構(gòu)酶活性結(jié)構(gòu)域的抗體，該抗體為單克隆抗體，可阻斷AGR2蛋白二硫鍵異構(gòu)酶活性結(jié)構(gòu)域的活性。?

所述的結(jié)合包括：離子鍵、非-離子鍵、氫鍵、范德華力以及疏水相互作用。?

所述的特異性結(jié)合AGR2蛋白二硫鍵異構(gòu)酶活性結(jié)構(gòu)域的抗體，其重鏈和輕鏈的氨基酸序列如Seq?ID?No.1和2所示，其中：阻斷抗體的重鏈可變區(qū)氨基酸序列如Seq?ID?No.3所示，阻斷抗體的輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如Seq?ID?No.4所示，阻斷抗體的重鏈CDR1區(qū)氨基酸序列如Seq?ID?No.5所示，阻斷抗體的重鏈CDR2區(qū)氨基酸序列如Seq?ID?No.6所示，阻斷抗體的重鏈CDR3區(qū)氨基酸序列如Seq?ID?No.7所示，阻斷抗體的輕鏈CDR1區(qū)氨基酸序列如Seq?IDNo.8所示，阻斷抗體的輕鏈CDR2區(qū)氨基酸序列如Seq?ID?No.9所示，阻斷抗體的輕鏈CDR3區(qū)氨基酸序列如Seq?ID?No.10所示。?

所述的特異性結(jié)合AGR2蛋白二硫鍵異構(gòu)酶活性結(jié)構(gòu)域的抗體，其對應(yīng)抗原表位的活性位點結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列如Seq?ID?No.11所示，AGR2與阻斷抗體的必要結(jié)合區(qū)氨基酸序列如Seq?ID?No.12所示。?

所述的抗體為鼠單克隆抗體，可特異結(jié)合AGR2蛋白二硫鍵異構(gòu)酶活性結(jié)構(gòu)域。?

本發(fā)明涉及上述抗體的制備方法，通過雜交瘤細(xì)胞株18A4制備得到。?

所述的雜交瘤細(xì)胞株18A4于2009年1月19日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏編號為CCTCC-C200902，保藏地址為湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學(xué)。?

本發(fā)明通過上述方法制備得到的抗體與AGR2的結(jié)合可采用本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)，例如ELISA來測定。?