[發(fā)明專利]一種人類DNA STR檢測用標準物質(zhì)的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110185834.0
• 申請日: 2011-07-01
• 公開（公告）號: CN102251032A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 畢萬里;何召明;葉健;趙興春
• 申請（專利權(quán)）人: 公安部物證鑒定中心;蘇州新海生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/63;C12N15/66;C12R1/19
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 馮瓊;李玉秋

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種人類DNA?STR檢測用標準物質(zhì)的制備方法，用于解決法醫(yī)學(xué)、人類學(xué)、遺傳學(xué)和疾病等領(lǐng)域的個體識別、親子鑒定以及基因診斷方面的DNA檢測的準確性和標準化問題。?

背景技術(shù)

標準物質(zhì)是具有準確量值的測量標準，按照“國際通用計量學(xué)基本術(shù)語”和“國際標準化組織指南30”，標準物質(zhì)(reference?material，RM)有如下定義：具有一種或多種足夠均勻和很好地確定了的特性值，用以校準測量裝置，評價測量方法或給材料賦值的一種材料或物質(zhì)。通過標準物質(zhì)實現(xiàn)了量值的傳遞和溯源，使得測量的標準可溯源至國際基本單位。?

DNA標準物質(zhì)(DNA?standard?reference?materials，簡稱SRM)，是具有特性量值的DNA測量標準，能夠保證DNA測量結(jié)果的有效性和可比性，保證測量結(jié)果可溯源至國際單位制或者其他國際一致認可的單位，確保實驗室DNA檢測結(jié)果的可比性及一致性。?

DNA檢測屬于生物技術(shù)的范疇，快速發(fā)展的生物技術(shù)對有效性檢測提出了更高的要求，生物計量作為一門嶄新的科學(xué)也得到了人們的關(guān)注。1999年10月，第21屆國際計量大會決定把生物計量學(xué)提上日程。隨后，物質(zhì)的量咨詢委員會(Consultative?Committee?for?Quantity?ofSubstance-Metrology，CCQM)成立了生物分析工作組(BioanalysisWorking?Group，BAWG)，至2007年已召開了11次會議。該工作組的主要目的是建立生物技術(shù)可溯源測量系統(tǒng)，優(yōu)先考慮的是核酸測量、蛋白質(zhì)測量及其方法、分析過程的標準化，以及標準物質(zhì)的研制，以?便鞏同核酸和蛋白質(zhì)測量的應(yīng)用領(lǐng)域。?

DNA檢測主要采用PCR方法檢測，人類DNA檢測用標準物質(zhì)通常是具有特性量值的人類DNA基因組，以人類DNA檢測用標準物質(zhì)作為模板進行PCR，可以為DNA檢測工作提供科學(xué)的溯源保證，以提高檢測結(jié)果的科學(xué)性和可靠性，也可以對儀器進行檢驗及校準、評價和研究新的DNA檢驗方法、實驗室認可、DNA分析的內(nèi)部質(zhì)量控制，還可以用于對DNA檢驗人員水平及能力的考核。?

在法醫(yī)DNA檢測領(lǐng)域，其檢測技術(shù)迅速發(fā)展，檢測過程的標準化及規(guī)范化顯得尤其重要，這就需要標準物質(zhì)對檢測過程進行質(zhì)量控制。1998年，美國聯(lián)邦調(diào)查局(FBI)的DNA建議委員會標準9.5指出：“實驗室每年或者實驗條件變化時都應(yīng)該使用美國國家標準技術(shù)研究所(NIST)提供的標準物質(zhì)(SRM)對DNA檢驗步驟進行核查?！蹦壳拔覈€沒有適合法醫(yī)DNA檢測的標準物質(zhì)。?

法醫(yī)DNA檢測經(jīng)歷了限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)、短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)和單核苷酸多態(tài)性(SNP)。同樣，法醫(yī)DNA標準物質(zhì)也隨著檢測技術(shù)的發(fā)展而不斷推出新的標準物質(zhì)。NIST作為美國的商業(yè)部門，負責開發(fā)國家及國際標準物質(zhì)。在NIST提供的標準物質(zhì)中，有多種標準物質(zhì)用于法醫(yī)DNA的分型檢測——基于RFLP分型技術(shù)的SRM2390、基于STR分型技術(shù)的SRM2391b、用于線粒體DNA檢測的SRM2392、用于Y染色體DNA分型的SRM2395和用于人類DNA定量的SRM2372。?

目前最常用于法醫(yī)DNA檢驗的遺傳標記為STR遺傳標記，短串聯(lián)重復(fù)序列(short?tandem?repeat，STR)是廣泛存在于人類基因組中的一類具有長度多態(tài)性的DNA序列。它由2-6個堿基作為核心序列，呈串聯(lián)重復(fù)排列，其長度多態(tài)性主要由核心序列的數(shù)目變化和重復(fù)次數(shù)不同而產(chǎn)生。STR分布廣、數(shù)目多，約占人類基因組的10％，一般認為，人類基因組平均每6-10kb就有1個STR基因座，不同STR基因座的組合產(chǎn)生了極為豐富的基因座圖譜信息，為法醫(yī)物證學(xué)中的個體識別和親子鑒定提供了基礎(chǔ)。法醫(yī)DNA?STR檢測用標準物質(zhì)用于?對DNA檢測過程中的質(zhì)量控制和質(zhì)量保證，通過使用標準物質(zhì)，使檢測過程的標準化和規(guī)范化，建立標準化的DNA分析技術(shù)，確保法醫(yī)DNA檢測分析結(jié)果的準確性、公正性和可靠性，為DNA的檢測結(jié)果提供了質(zhì)量保障，DNA標準物質(zhì)也有利于各國各實驗室之間的數(shù)據(jù)的交流。?