[發明專利]一種雌性生殖干細胞的體外分離及培養方法

有效

• 申請號: 201110185764.9
• 申請日: 2011-07-05
• 公開（公告）號: CN102250830A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 華進聯;胡玥;白耀富
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 陸萬壽

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及動物干細胞的體外增殖、分化、分離，特別涉及一種雌性生殖干細胞的體外分離及培養方法。

背景技術

生殖細胞的發生、增殖、分化的研究是生命科學研究的重要課題之一。在動物繁殖育種中，高產、優質的遺傳資源完全依賴于生殖細胞來完成遺傳；在人類，由于卵子的發生、成熟障礙等引起的不孕癥更是困擾眾多患者的一個現實問題；在基礎研究中，卵子更是發育生物學研究的最重要研究對象之一；因此卵母細胞的發生、分化的研究，在畜牧業生產和生物醫學研究中具有重要的意義。然而高等哺乳動物卵母細胞的發生、轉移、分化完全在體內完成，因此很難動態實時地檢測和研究其中的分子事件(Hua等，Recent?advances?in?the?derivation?of?germ?cells?from?the?embryonic?stem?cells.StemCells?and?Development，2008，17：399-411)。

干細胞是一類具有自我更新、高度增殖和多向分化潛能的細胞群體。胚胎干細胞(ES細胞或ESCs)是由早期胚胎內細胞團(ICM)或原始生殖細胞(PGCs)分離而來的多能干細胞。由于胚胎干細胞的獨特生物學特性，使胚胎干細胞在細胞替代治療、組織器官修復與重建、基因治療以及發育生物學模型、新藥開發和毒理實驗等，幾乎所有的生命科學和生物醫藥領域均具有重要的意義。

40多年前，科學家就發現雄性哺乳動物生殖器官中有雄性生殖干細胞-精原干細胞的存在，并成功地進行了體外培養。最近人們發現，成年動物睪丸的精原細胞在體外合適的條件下，可能轉化為多能性的雄性生殖干細胞(Matsui等，Derivation?of?pluripotential?embryonic?stem?cells?from?murine?primordial?germ?cells?in?culture.Cell，1992，70：841-847；董武子等，新生牛雄性生殖細胞源類ES的培養及檢測，畜牧獸醫學報，2007，38(2)：144-148；Guan等，Pluripotency?of?spermatogonial?stem?cells?from?adult?mouse?testis.Nature，2006，440：1199-1203；Sesndel等，Generation?of?functional?multipotent?adult?stem?cells?from?GPR125⁺germline?progenitors.Nature，2007，449：346-350；Kanatsu-Shinohara等，Pluripotency?of?a?single?spermatogonial?stem?cell?in?mice.Biol?Reprod.，2008，78(4)：681-687；Kanatsu等，Generation?of?pluripotent?stem?cells?from?neonatal?mouse?testis.Cell，2004，119：1001-1012；Bukovsky等，Generation?of?pluripotent?stem?cells?from?adult?human?testis.Nature，456，344-349；Kanatsu-Shinohara等，Pluripotency?of?a?single?spermatogonial?stem?cell?in?mice.Biol?Reprod.，2008，78(4)：681-687)。所以，mGSCs可做為轉基因動物和克隆動物的理想載體細胞，而且比起正常的ES細胞，mGSCs細胞來源數量多，培養相對容易。但對于生殖細胞的研究來說，更為重要的是mGSCs能夠有效地分化產生出精子(Ko等，Induction?of?pluripotency?in?adult?unipotent?germline?stem?cells.Cell?Stem?Cell，2009，5：87-96)。

但對于雌性哺乳動物，傳統觀點認為：所有生殖細胞都在雌性胎兒胚胎發育中進入減數分裂，出生后不再產生新的卵母細胞。因此，在其之后的生命周期中，只有有限的雌性生殖細胞存在于生殖細胞池中，隨著年齡的增長，其數量將不斷減少，而不存在一種干細胞對其進行補充和再生。近年來，有研究者提示出生后雌性小鼠的生殖細胞存在再生的活性。