[發明專利]一種芽孢桿菌微生態制劑及其液固結合發酵制備工藝

無效

• 申請號: 201110184359.5
• 申請日: 2011-07-04
• 公開（公告）號: CN102409007A
• 公開（公告）日: 2012-04-11
• 發明（設計）人: 劉晉生;孫駿躍;宋詼;譚明;李麗;劉陽;鄭雯;徐健勇;吳雅倩
• 申請（專利權）人: 天津市育琪生物技術有限公司;天津工業生物技術研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K1/16;C12R1/125;C12R1/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種微生態制劑，由枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌活菌分別與固體載體組成。

2.根據權利要求1所述的一種微生態制劑，其特征在于：使用的固體培養基中含有麩皮和1%~2%（質量比）的葡萄籽提取物。

3.根據權利要求1所述微生態制劑，其制備方法包括以下步驟：

1）一級種子培養：一級液體種子培養基：蛋白胨16g/L，酵母粉10g/L，NaCl?5g/L，pH?6.0~7.0，121℃滅菌20min；培養條件：將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌分別接種于固體LB培養基平板，37℃培養24h，挑取單菌落接種于10ml液體種子培養基，于旋轉式搖床200rpm，37℃培養14~18h，得到一級種子液；

2）二級種子培養：二級液體種子培養基：蛋白胨16g/L，酵母粉10g/L，NaCl?5g/L，pH?6.0~7.0，121℃滅菌20min；培養條件：于1L三角瓶中裝入200ml二級液體種子培養基，分別接種1%~2%上述一級種子液，37℃，200rpm培養，發酵10~18h，得到二級種子液；

3）高密度液體發酵：補料液：葡萄糖500g/L，蛋白胨200g/L；液體培養基：蛋白胨16g/L，酵母粉10?g/L，NaCl?5?g/L，pH?6.0~7.0，121℃滅菌20min；培養條件：于5~50L發酵罐中裝入50%體積的液體培養基，接種培養基體積1~2%的上述二級種子液，37℃，攪拌200rpm培養6~8h后，開始流加補料液，流速50ml/min，發酵至17~24h，停止發酵，得到高密度菌體發酵液；

4）固相載體處理：固相培養基（麩皮和質量比1%~2%的葡萄籽提取物）采用微波干燥殺菌，功率10kW時間30min，水分含量≤5%；

5）液固混配：將步驟3）中所得的菌體發酵液按照重量比1~10%與步驟4）中處理后的固相培養基分別混合，充分拌勻，得到發酵曲；

6）快速固體發酵：將步驟5）中所得發酵曲在35~37℃條件下靜置1~3h，進行快速固體發酵，使菌種成熟并產生芽孢，得到固體發酵產物；

7）粉碎：將步驟6）中得到的上述固體發酵產物粉碎，過40~60目篩，經過分袋包裝得到成品微生態制劑。

4.根據權利要求3所述微生態制劑的制備方法，其特征在于：使用液體培養基高密度發酵枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌后，按照重量比1~10%分別與經滅菌后的固體培養基進行混勻接種，隨后在35~37℃條件下進行超短期（1~3小時）固體發酵。