[發(fā)明專利]檢測環(huán)孢霉素A藥物濃度的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110183670.8
• 申請日: 2011-06-30
• 公開（公告）號: CN102368072A
• 公開（公告）日: 2012-03-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈鳳芹;焦守恕;李全
• 申請（專利權(quán)）人: 同昕生物技術(shù)（北京）有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/535;G01N1/28;G01N1/38;G01N1/34
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11129
• 代理人: 張濤

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢測試劑，特別是一種檢測環(huán)孢霉素A藥物濃度的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒。

背景技術(shù)

環(huán)孢霉素A(cyclosporin?A)是一種從真菌中提取，由瑞士山德士藥廠1976年首次發(fā)現(xiàn)并報(bào)告有免疫抑制作用的藥物。同年英國劍橋的R.Calne在動物的器官移植上應(yīng)用取得了令人難忘的結(jié)果，并于1978年成功地試用于臨床腎臟移植和骨髓移植。環(huán)孢霉素A的出現(xiàn)對器官移植的發(fā)展起了巨大的推動作用，如今被稱之為“器官移植的環(huán)孢霉素”，是目前最常用的免疫抑制劑，也用于自身免疫疾病的治療。其主要作用是通過可選擇性地抑制免疫應(yīng)答，有選擇性地抑制活性T細(xì)胞增殖依賴的細(xì)胞因子IL-2，致使T細(xì)胞分化、發(fā)育產(chǎn)生障礙，從而保護(hù)移植物(器官)免遭T細(xì)胞毒性作用的破壞，而對其他的免疫細(xì)胞的抑制作用則相對較弱。

在臨床上，環(huán)孢霉素A的使用劑量、血藥濃度與療效、藥物毒性密切相關(guān)，在高血濃度時有一定的毒性，主要是神經(jīng)毒性和腎毒性。因此臨床使用需要制定合理的用藥方案，經(jīng)常測定血中環(huán)孢霉素A的濃度來監(jiān)測環(huán)孢霉素A的用量是否合適。

為達(dá)到個體化給藥方案，避免毒副反應(yīng)和排斥反應(yīng)的發(fā)生，在有條件的醫(yī)院都將監(jiān)測其血藥濃度列為了常規(guī)工作，目前測定全血中環(huán)孢霉素A濃度的方法主要有兩大類：高效液相色譜法和免疫標(biāo)記分析法。

高效液相色譜法是70年代發(fā)展起來的一種測定血藥濃度的物理方法，采用特殊裝置的柱色譜法，利用同一種吸附劑對不同物質(zhì)吸附能力的差別進(jìn)行分離鑒定，其特異性高，只測定環(huán)孢霉素A母藥的濃度而不測定其代謝物的濃度，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，但其樣本前處理操作繁瑣，且需特殊的技術(shù)和昂貴的設(shè)備以及高素質(zhì)的專業(yè)技師進(jìn)行操作，一定程度上妨礙其深入開展和普及。

免疫標(biāo)記分析法是以抗原或半抗原與抗體之間特異性親和反應(yīng)為基礎(chǔ)的免疫標(biāo)記技術(shù)目前用于測定血藥濃度的免疫分析法常用的標(biāo)記物有放射性核素、熒光劑和酶三大類，其測定技術(shù)分別稱為放射免疫分析法(Radioimmunoassay，RIA)、熒光免疫分析法(Fluoroimmunoassay，F(xiàn)PIA)和酶免分析法(Enzyme?immunoassay，EIA)。他們共同的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)、靈敏度和精密度高、準(zhǔn)確性好、簡便、快速，易實(shí)現(xiàn)自動化，適用于常規(guī)和急診工作。放射免疫測定法雖然具有高靈敏度、高特異性的優(yōu)點(diǎn)，但其操作步驟較多，需要特殊的檢測設(shè)備，并且使操作人員受到放射性危害，同時試劑盒的使用期限也會受標(biāo)記的放射性物質(zhì)的衰變期的限制，故近年來許多本來使用RIA測定的藥物多已改用其他免疫分析方法。熒光偏振免疫測定法是基于待測物和聯(lián)接了熒光的待測物對特定的待測物抗體上有限的受體結(jié)合位點(diǎn)的競爭性結(jié)合。當(dāng)待測樣品中存在能與抗體結(jié)合的藥物時，將形成無熒光藥物-抗體復(fù)合物，從而引起偏振度的下降，根據(jù)該偏振度下降的程度即可確定出樣品中待測物的濃度。該法靈敏度高，選擇性好，但缺點(diǎn)是需要特殊的檢測設(shè)備，價格較為昂貴，操作也不太方便。酶免法是用酶代替熒光體標(biāo)記抗原或抗體，利用該酶的底物顯色的程度來確定樣品中藥物的濃度。

化學(xué)發(fā)光免疫分析是繼熒光、放射性同位素和酶免分析之后發(fā)展起來的一項(xiàng)新的免疫分析技術(shù)，根據(jù)大量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果及臨床應(yīng)用資料，從實(shí)用性、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性、靈敏性及發(fā)展前景來看，在非放射性標(biāo)記分析技術(shù)中化學(xué)發(fā)光免疫分析處于領(lǐng)先地位，代表了當(dāng)今世界發(fā)展的方向和潮流，它不僅具有免疫反應(yīng)的特異性，而且具有化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的高靈敏度，成為取代放射免疫分析和酶免疫分析技術(shù)的首選。

現(xiàn)有技術(shù)中的化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒為封閉式全自動化學(xué)發(fā)光測量系統(tǒng)，需要昂貴的全自動化學(xué)發(fā)光測量儀，從而限制了推廣使用，無法廣泛的應(yīng)用于臨床診斷和科研工作。本發(fā)明的試劑盒采用微孔板化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)，既可以應(yīng)用于開放式的半自動化學(xué)發(fā)光測量儀，也可用于全自動的測量系統(tǒng)，可實(shí)現(xiàn)大批量快速檢測，適用成本低，更易推廣應(yīng)用。

發(fā)明專利內(nèi)容

本發(fā)明根據(jù)上述領(lǐng)域的缺陷及國內(nèi)現(xiàn)狀，特別是一種能夠簡便、快速、靈敏、穩(wěn)定的檢測血中環(huán)孢霉素A藥物濃度的試劑盒，適用于國內(nèi)檢測儀器。

檢測環(huán)孢霉素A藥物濃度的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，包括：抗環(huán)孢霉素A的特異性單克隆抗體或抗抗體包被的酶標(biāo)板，酶標(biāo)記的環(huán)孢霉素A半抗原；或與載體蛋白偶聯(lián)的環(huán)孢霉素A半抗原包被的酶標(biāo)板，酶標(biāo)記的抗環(huán)孢霉素A的特異性單克隆抗體或抗抗體；其特征在于所述用于包被酶標(biāo)板的環(huán)孢霉素A半抗原和酶標(biāo)記的環(huán)孢霉素A半抗原采用以下處理方法制備而得：