[發明專利]檢測環孢霉素A藥物濃度的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201110183670.8
• 申請日: 2011-06-30
• 公開（公告）號: CN102368072A
• 公開（公告）日: 2012-03-07
• 發明（設計）人: 賈鳳芹;焦守恕;李全
• 申請（專利權）人: 同昕生物技術（北京）有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/535;G01N1/28;G01N1/38;G01N1/34
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 張濤

1.檢測環孢霉素A藥物濃度的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，包括：抗環孢霉素A的特異性單克隆抗體或抗抗體包被的酶標板，酶標記的環孢霉素A半抗原；或與載體蛋白偶聯的環孢霉素A半抗原包被的酶標板，酶標記的抗環孢霉素A的特異性單克隆抗體或抗抗體；其特征在于：所述用于包被酶標板的環孢霉素A半抗原和酶標記的環孢霉素A半抗原采用以下處理方法制備而得：

(1)環孢霉素A按質量體積比3g∶1ml比例溶于嘧啶中，再逐滴加入與嘧啶等體積的二氯甲烷，在常溫充氬氣環境中攪拌過夜；

(2)將步驟(1)的產物真空蒸發干燥得到固體殘渣溶于二氯甲烷，溶液過凝膠柱分離純化，得到二氧化硅化環孢霉素A

(3)制備一級粗產品：

按質量體積比5g∶1ml將TMS-CsA溶入乙醚中，再按TMS-CsA與甲苯的質量體積比為1g∶30ml加入甲苯和按TMS-CsA與氫化鈉質量比2∶1加入氫化鈉，在通氬氣的條件下常溫攪拌30min后冷卻到4℃，按TMS-CsA與環氧乙烷的質量體積比為1g∶6ml用注射器加入環氧乙烷，然后將反應器加蓋封口，常溫攪拌反應24小時后，加入2～3倍反應物體積的水，用1M的HCL酸化，加入4～6倍反應物體積的二氯甲烷混合，分離有機相后，加水洗提，洗提產物用硫酸鎂干燥并過凝膠柱分離純化得到一級粗產品；

于常溫、通氬氣的條件下，將一級粗產品2份和1，4丁二醇二縮水甘油醚按質量1份溶于甲苯中，一級粗產品與甲苯的質量體積比為1g∶5～10ml，常溫攪拌2h后，按一級粗產品與乙酸乙酯質量體積比為1g∶100～200ml加入乙酸乙酯，及與乙酸乙酯等體積的水，分離混合液中有機相，用50％的氯化鈉溶液洗提有機相，洗提產物用硫酸鎂干燥并過凝膠柱分離純化得到二級粗產品；

(4)在攪拌狀態下，按二級粗產品與甲醇的質量體積比為1g∶40ml將二級粗產品加入甲醇中，補充水直至混合液有明顯霧團，加入與二級粗產品質量比為1∶0.5～1.5的無水碳酸鉀，常溫通氬氣攪拌過夜，用1M鹽酸酸化處理，加入與甲醇等體積的水，用二氯甲烷提取有機相，用與甲醇等體積的鹽水洗滌有機相，硫酸鎂干燥得到環孢霉素A半抗原。

2.根據權利要求1所述的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，所述抗環孢霉素A的特異性單克隆抗體包被的酶標板的包被濃度為：0.01-0.08μg/ml。

3.根據權利要求1所述的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，所述與載體蛋白偶聯的環孢霉素A半抗原包被的酶標板的包被濃度為0.05-0.15μg/ml。

4.根據權利要求1所述的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，所述抗抗體包被的酶標板的包被濃度為：0.05-0.15μg/ml。?

5.根據權利要求1～4任一所述的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，所述載體蛋白為甲狀腺蛋白、鼠血清蛋白、人血清蛋白、牛血清蛋白、兔血清蛋白、藍血蛋白或卵清蛋白。

6.根據權利要求5所述的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，所述試劑盒還包括樣品前處理液、樣品稀釋液、環孢霉素A標準品溶液、環孢霉素A質量控制溶液、顯色液、終止液、濃縮洗滌液。

7.根據權利要求6所述的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，所述酶標記所用的標記酶為辣根過氧化物酶，包括為底物A液和底物B液，其中A液為的組成為：pH值為7.2～8.5，濃度為10～30mM的磷酸鹽緩沖液中加入終濃度(V/V)為0.02～0.1％Proclin300，0.1～1.0％吐溫-20和10mM過氧化脲溶液；B液為50mM的Tris-HCI緩沖液中加入終濃度(W/V)為0.02～0.1％Proclin300，1.0～3.0mM的4-碘苯酚，0.1％～1％的BSA，0.1～1％的溴化十六烷基三甲基銨，10～50mM魯米諾溶液。?