[發明專利]改型擴展青霉脂肪酶基因及其構建和表達方法

無效

• 申請號: 201110183472.1
• 申請日: 2011-07-01
• 公開（公告）號: CN103014036A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 王劍英;陳健;王宏;蘭瑛
• 申請（專利權）人: 深圳市綠微康生物工程有限公司
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N9/20;C12N15/66;C12N15/63
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司 44218
• 代理人: 胡堅

1.一種改型擴展青霉脂肪酶基因，其特征在于：所述的基因具有SEQ?ID?NO：1的堿基序列。

2.由權利要求1所述基因表達的擴展青霉脂肪酶的蛋白質序列，其特征在于：所述的序列具有SEQ?ID?NO：4的氨基酸序列。

3.一種高效表達權利要求1所述改型擴展青霉脂肪酶基因質粒的構建方法，其特征在于：所述的構建方法包括下述的步驟：

1)獲得潮霉素抗性表達盒克隆至目標質粒上，獲得潮霉素抗性的重組質粒；

2)利用PCR技術分別擴增青霉的脂肪酶基因、構巢曲霉3-磷酸甘油醛脫氫酶啟動子和構巢曲霉色氨酸合成酶終止子，得到有強啟動子驅動的PEL基因表達盒；

3)將該PEL基因表達盒插入到潮霉素抗性的重組質粒中，獲得含潮霉素篩選標記的PEL基因超表達載體。

4.根據權利要求3所述的構建方法，其特征在于：步驟1)中的潮霉素抗性表達盒為構巢曲霉色氨酸合成酶啟動子驅動的潮霉素磷酸轉移酶基因表達盒。

5.根據權利要求3所述的構建方法，其特征在于：所述構建方法包括如下的步驟：

1)利用PCR技術或限制性酶切技術獲得潮霉素抗性表達盒并克隆到目標質粒上，獲得潮霉素抗性的重組質粒；

2)PCR擴增構巢曲霉3-磷酸甘油醛脫氫酶啟動子后將其克隆至目標質粒，得到重組質粒；

3)PCR擴增脂肪酶基因和構巢曲霉色氨酸合成酶終止子，產物經凝膠回收后克隆至目標質粒的相應位點，得到含PEL基因表達盒的載體；

4)利用限制性酶切技術獲得PEL基因表達盒，然后克隆至含有潮霉素抗性的重組質粒上，獲得含潮霉素篩選標記的PEL基因超表達載體。