[發(fā)明專利]改型擴(kuò)展青霉脂肪酶基因及其構(gòu)建和表達(dá)方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110183472.1
• 申請日: 2011-07-01
• 公開（公告）號(hào): CN103014036A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王劍英;陳健;王宏;蘭瑛
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市綠微康生物工程有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/55
• 分類號(hào): C12N15/55;C12N9/20;C12N15/66;C12N15/63
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司 44218
• 代理人: 胡堅(jiān)

1.一種改型擴(kuò)展青霉脂肪酶基因，其特征在于：所述的基因具有SEQ?ID?NO：1的堿基序列。

2.由權(quán)利要求1所述基因表達(dá)的擴(kuò)展青霉脂肪酶的蛋白質(zhì)序列，其特征在于：所述的序列具有SEQ?ID?NO：4的氨基酸序列。

3.一種高效表達(dá)權(quán)利要求1所述改型擴(kuò)展青霉脂肪酶基因質(zhì)粒的構(gòu)建方法，其特征在于：所述的構(gòu)建方法包括下述的步驟：

1)獲得潮霉素抗性表達(dá)盒克隆至目標(biāo)質(zhì)粒上，獲得潮霉素抗性的重組質(zhì)粒；

2)利用PCR技術(shù)分別擴(kuò)增青霉的脂肪酶基因、構(gòu)巢曲霉3-磷酸甘油醛脫氫酶啟動(dòng)子和構(gòu)巢曲霉色氨酸合成酶終止子，得到有強(qiáng)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的PEL基因表達(dá)盒；

3)將該P(yáng)EL基因表達(dá)盒插入到潮霉素抗性的重組質(zhì)粒中，獲得含潮霉素篩選標(biāo)記的PEL基因超表達(dá)載體。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的構(gòu)建方法，其特征在于：步驟1)中的潮霉素抗性表達(dá)盒為構(gòu)巢曲霉色氨酸合成酶啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因表達(dá)盒。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的構(gòu)建方法，其特征在于：所述構(gòu)建方法包括如下的步驟：

1)利用PCR技術(shù)或限制性酶切技術(shù)獲得潮霉素抗性表達(dá)盒并克隆到目標(biāo)質(zhì)粒上，獲得潮霉素抗性的重組質(zhì)粒；

2)PCR擴(kuò)增構(gòu)巢曲霉3-磷酸甘油醛脫氫酶啟動(dòng)子后將其克隆至目標(biāo)質(zhì)粒，得到重組質(zhì)粒；

3)PCR擴(kuò)增脂肪酶基因和構(gòu)巢曲霉色氨酸合成酶終止子，產(chǎn)物經(jīng)凝膠回收后克隆至目標(biāo)質(zhì)粒的相應(yīng)位點(diǎn)，得到含PEL基因表達(dá)盒的載體；

4)利用限制性酶切技術(shù)獲得PEL基因表達(dá)盒，然后克隆至含有潮霉素抗性的重組質(zhì)粒上，獲得含潮霉素篩選標(biāo)記的PEL基因超表達(dá)載體。