[發(fā)明專(zhuān)利]檢測(cè)肺炎衣原體IgM抗體的試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110183271.1
• 申請(qǐng)日: 2011-06-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102368068A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-03-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 彭京勝;焦守恕;李全
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 同昕生物技術(shù)（北京）有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/569
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/569;G01N33/531;G01N21/76
• 代理公司: 北京海虹嘉誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11129
• 代理人: 張濤

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢測(cè)試劑，特別是一種檢測(cè)肺炎衣原體IgM抗體的試劑盒。

背景技術(shù)

肺炎衣原體(Chlamydia?pneumoniae，Cpn)是1989年確定的一種嚴(yán)格真核細(xì)胞內(nèi)寄生的原核細(xì)胞微生物，根據(jù)2004年公布的伯杰氏細(xì)菌分類(lèi)學(xué)手冊(cè)，已被更名為肺炎嗜衣原體(Chlamydophila?pneumoniae，Cpn)，與鸚鵡熱嗜衣原體、流產(chǎn)嗜衣原體、豚鼠嗜衣原體、貓嗜衣原體、獸類(lèi)嗜衣原體共同組成嗜衣原體屬。CPn基因組大小約1.2Mbp，由21個(gè)Pmp基因，一個(gè)III型分泌毒力因子系統(tǒng)，3個(gè)絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，2個(gè)磷脂酶-D樣蛋白基因組成。

Cpn的感染極為普遍，呈世界性的分布，主要引起人類(lèi)的呼吸道感染，與人口密度呈正相關(guān)，在臨床上多以隱性、持續(xù)性感染形式存在，反復(fù)遷延導(dǎo)致難以治療的并發(fā)癥，與哮喘、支氣管炎、慢性阻塞性肺疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗塞、冠心病等心腦血管疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。兒童感染率在20％左右，隨著年齡的增加感染率迅速上升，青壯年可達(dá)50-60％，老年70-80％。肺炎衣原體通過(guò)呼吸道分泌物的進(jìn)行人與人傳播，家庭、學(xué)校、軍隊(duì)以及其他人口集中的工作區(qū)域可存在小范圍的流行。目前，肺炎衣原體已是繼肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌之后引起社區(qū)獲得性肺炎(community?acquired?pneumonia，CAP)的主要病原體，肺炎衣原體急性感染率占23％，肺炎病人僅占感染者的小部分，70-90％為亞臨床表現(xiàn)。肺炎衣原體感染的潛伏期為15-23天，可引起上呼吸道感染，如鼻竇炎、中耳炎和咽炎，也可引起下呼吸道感染，如支氣管炎和肺炎。呼吸道感染多數(shù)表現(xiàn)為咽痛、發(fā)熱、咳嗽，病情通常較輕，有自限性。老年肺炎衣原體肺炎病人癥狀可能較為嚴(yán)重，有時(shí)甚至致死，尤其是合并細(xì)菌性感染或存在慢性阻塞性肺疾病等時(shí)。因此，Cpn感染早期診斷對(duì)于盡早發(fā)現(xiàn)和治療Cpn感染性疾病非常重要。

目前對(duì)Cpn的實(shí)驗(yàn)室診斷方法主要有病原體分離培養(yǎng)技術(shù)、核酸檢測(cè)技術(shù)、血清學(xué)診斷技術(shù)等方法，國(guó)際上尚無(wú)公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)方法。其中病原體分離培養(yǎng)技術(shù)，由于CPn的抵抗力較弱，對(duì)室溫或冰凍敏感，難以從臨床標(biāo)本中分離培養(yǎng)成功，一般實(shí)驗(yàn)室難以開(kāi)展，已逐漸為其他快速檢測(cè)方法所取代。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)雖然試驗(yàn)條件要求低，不需要特殊儀器，但具有影響因素復(fù)雜、操作步驟繁鎖等缺陷。微量免疫熒光(micro-immunofluorescence，MIF)是目前CPn感染診斷最常用且最敏感的血清學(xué)方法，其結(jié)果被認(rèn)為是檢測(cè)CPn感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”。其缺點(diǎn)是非常費(fèi)時(shí)費(fèi)力，MIF檢測(cè)結(jié)果的可靠性在很大程度上依賴(lài)于抗原的制備和檢測(cè)者的個(gè)人經(jīng)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)操作的主觀(guān)性很大，僅限于少數(shù)研究實(shí)驗(yàn)室使用。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked?immunosorbent?assay，ELISA)具有快速、敏感、簡(jiǎn)便、易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)，使其得到迅速的發(fā)展和廣泛應(yīng)用，成為最廣泛應(yīng)用的檢測(cè)方法之一。

化學(xué)發(fā)光免疫分析(Chemiluminescence?Immunoassay，CLIA)是近年來(lái)繼放射免疫分析和酶免疫分析之后發(fā)展起來(lái)的一種高靈敏度的微量測(cè)定技術(shù)。具有高靈敏度、檢測(cè)范圍寬、操作簡(jiǎn)便快速等優(yōu)點(diǎn)，作為放射性免疫分析、酶免疫分析的替代者，是當(dāng)前最理想的免疫分析方法。

親和素-生物素系統(tǒng)在免疫分析中的應(yīng)用有多種形式，其中包括信號(hào)放大、間接包被等形式。信號(hào)放大指生物素化的抗原或抗體與酶標(biāo)親和素反應(yīng)體系，其優(yōu)點(diǎn)是利用生物素-親和素放大效應(yīng)提高檢測(cè)靈敏度，缺點(diǎn)是親和素的等電點(diǎn)較高，對(duì)聚苯乙烯等固相載體有較高的非特異性吸附，因而導(dǎo)致本底較高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明根據(jù)上述領(lǐng)域的存在的空白和需求，提供一種檢測(cè)肺炎衣原體IgM抗體的試劑盒，實(shí)驗(yàn)證明，具有操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，特異性好的優(yōu)點(diǎn)。

檢測(cè)肺炎衣原體IgM抗體的試劑盒，包括包被親和素的微孔板，生物素化的肺炎衣原體抗原、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗人IgM和化學(xué)發(fā)光底物，所述化學(xué)發(fā)光底物包括底物液A和底物液B，其中A液為的組成為：pH值為7.2～8.5，濃度為10～30mM的磷酸鹽緩沖液中加入終濃度(W/V)為0.02～0.1％Proclin300，0.1～1.0％吐溫-20和10mM過(guò)氧化脲溶液；B液為50mM的Tris-HCI緩沖液中加入終濃度(W/V)為0.02～0.1％Proclin300，1.0～3.0mM的4-碘苯酚，0.1％～1％的BSA，0.1～1％的溴化十六烷基三甲基銨，10～50mM魯米諾溶液。