[發明專利]具有抑制纖溶酶活性的重組textilinin-1及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201110178605.6
• 申請日: 2011-06-29
• 公開（公告）號: CN102850451A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發明（設計）人: 薛百忠;徐梅;楊宇;張宏杰;李娜;劉劍;邸偉慶;劉宏大;王宏英;薛雁
• 申請（專利權）人: 遼寧諾康生物制藥有限責任公司
• 主分類號: C07K14/81
• 分類號: C07K14/81;C12N15/15;C12N15/81;C12N15/85;A61K38/57;A61P7/04
• 代理公司: 沈陽晨創科技專利代理有限責任公司 21001
• 代理人: 張晨

1.一種具有抑制纖溶酶活性的重組textilinin-1，其氨基酸序列為：?

KDRPDFCELP??ADTGPCRVRF??PSFYYNPDEK??KCLEFIYGGC??EGNANNFITK??EECESTCAA，其特征在于，所述具有抑制纖溶酶活性的重組textilinin-1，是通過將人工合成的textilinin-1結構基因在酵母菌中，或者在CHO細胞或其它哺乳動物細胞中，以分泌表達的方式大量產生獲得，其中人工合成textilinin-1結構基因序列為：?

1????AAG?GAT?AGA?CCA?GAT?TTT?TGT?GAA?TTG?CCA?GCT?GAT?ACT?GGT?CCA???45

46???TGT?AGA?GTT?AGA?TTT?CCA?TCT?TTT?TAC?TAC?AAC?CCA?GAT?GAA?AAG???90

91???AAG?TGT?TTG?GAA?TTT?ATT?TAC?GGT?GGT?TGT?GAA?GGT?AAC?GCT?AAC??135

136??AAC?TTT?ATT?ACT?AAG?GAA?GAA?TGT?GAA?TCT?ACT?TGT?GCT?GCT?TAA??180。

2.一種權利要求1所述重組textilinin-1的制備方法，其特征在于，制備方法為：將人工合成的textilinin-1結構基因在酵母菌中，或者在CHO細胞或其它哺乳動物細胞中，以分泌表達的方式大量產生重組textilinin-1，其中人工合成textilinin-1結構基因序列為：?

1????AAG?GAT?AGA?CCA?GAT?TTT?TGT?GAA?TTG?CCA?GCT?GAT?ACT?GGT?CCA???45

46???TGT?AGA?GTT?AGA?TTT?CCA?TCT?TTT?TAC?TAC?AAC?CCA?GAT?GAA?AAG???90

91???AAG?TGT?TTG?GAA?TTT?ATT?TAC?GGT?GGT?TGT?GAA?GGT?AAC?GCT?AAC??135

136??AAC?TTT?ATT?ACT?AAG?GAA?GAA?TGT?GAA?TCT?ACT?TGT?GCT?GCT?TAA??180。

3.按照權利要求2所述重組textilinin-1的制備方法，其特征在于：所述酵母菌為甲醇酵母菌。

4.按照權利要求3所述重組textilinin-1的制備方法，其特征在于：在甲醇酵母菌中實現分泌表達時，依據textilinin-1的天然氨基酸序列，選擇甲醇酵母菌比較偏好的密碼子，人工合成textilinin-1結構基因序列。

5.按照權利要求3所述重組textilinin-1的制備方法，其特征在于：在甲醇酵母菌中實現分泌表達時，將人工合成textilinin-1結構基因插入到甲醇酵母菌表達載體pPIC9K或pPICZα中。

6.按照權利要求3所述重組textilinin-1的制備方法，其特征在于：在甲醇酵母菌中實現分泌表達時，利用酵母菌的α-信號肽，PHO1信號肽將重組textilinin-1移出細胞，其中在信號肽序列與textilinin-1序列之間插入KEX2蛋白酶識別序列。

7.按照權利要求2或3所述重組textilinin-1的制備方法，其特征在于：其發酵工藝參數為：表達時pH值為3-5，表達溫度為23-25℃。

8.按照權利要求2或3所述重組textilinin-1的制備方法，其特征在于：其純化工藝為陽離子交換和陰離子交換。

9.按照權利要求8所述重組textilinin-1的制備方法，其特征在于：選用Capto?MMC和Q?hp作為純化textilinin-1的填料。

10.權利要求1所述重組textilinin-1在制造止血藥物方面的用途。