[發明專利]一種蟬棒束孢菌株的分子鑒定方法無效
| 申請號: | 201110178274.6 | 申請日: | 2011-06-28 |
| 公開(公告)號: | CN102851353A | 公開(公告)日: | 2013-01-02 |
| 發明(設計)人: | 鮑曉妮;陳超;魏寧;張健;江三多;孫長勝 | 申請(專利權)人: | 上海泛亞生命科技有限公司 |
| 主分類號: | C12Q1/68 | 分類號: | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司: | 上海光華專利事務所 31219 | 代理人: | 許亦琳;余明偉 |
| 地址: | 200433 上海市楊*** | 國省代碼: | 上海;31 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 蟬棒束孢 菌株 分子 鑒定 方法 | ||
1.一種蟬棒束孢菌株CGMCC?NO.3453的分子鑒定方法,包括下列步驟:
1)提取待測菌株的基因組DNA;
2)采用ITS5和ITS4這對引物對步驟1)提取的基因組DNA作PCR擴增;
ITS5:5’-GGAAGTAAAAGTCCTAACAAGG-3’
ITS4:5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’:
3)擴增產物在瓊脂糖凝膠上電泳,EB染色,觀察DNA擴增結果;
4)對擴增獲得的DNA片段進行回收和純化;
5)將純化后DNA片段做雙向測序;
6)將測得DNA序列與SEQ?ID?NO:3作比對;
7)若比對結果表明,待測菌株ITS序列與SEQ?ID?NO:3的內容和排列順序完全一致,則待測菌株就是蟬棒束孢CGMCC?NO.3453菌株。
2.如權利要求1所述蟬棒束孢菌株CGMCC?NO.3453的分子鑒定方法,其特征在于,步驟2)所述PCR擴增體系為:每20ul反應體系,內含1×EX?PCR緩沖液、1.5mMdNTP、正反向引物各10pmol、EX?Tag酶1u和DNA樣本200ng及加ddH2O至20μl。
3.如權利要求1所述蟬棒束孢菌株CGMCC?NO.3453的分子鑒定方法,其特征在于,步驟2)所述PCR擴增條件為:94℃3分鐘為1個循環;而后94℃30秒,55℃30秒,72℃40秒為38個循環;最后72℃7分鐘延伸。
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