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[發明專利]一種蟬棒束孢菌株的分子鑒定方法無效

專利信息
申請號: 201110178274.6 申請日: 2011-06-28
公開(公告)號: CN102851353A 公開(公告)日: 2013-01-02
發明(設計)人: 鮑曉妮;陳超;魏寧;張健;江三多;孫長勝 申請(專利權)人: 上海泛亞生命科技有限公司
主分類號: C12Q1/68 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04
代理公司: 上海光華專利事務所 31219 代理人: 許亦琳;余明偉
地址: 200433 上海市楊*** 國省代碼: 上海;31
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 一種 蟬棒束孢 菌株 分子 鑒定 方法
【權利要求書】:

1.一種蟬棒束孢菌株CGMCC?NO.3453的分子鑒定方法,包括下列步驟:

1)提取待測菌株的基因組DNA;

2)采用ITS5和ITS4這對引物對步驟1)提取的基因組DNA作PCR擴增;

ITS5:5’-GGAAGTAAAAGTCCTAACAAGG-3’

ITS4:5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’:

3)擴增產物在瓊脂糖凝膠上電泳,EB染色,觀察DNA擴增結果;

4)對擴增獲得的DNA片段進行回收和純化;

5)將純化后DNA片段做雙向測序;

6)將測得DNA序列與SEQ?ID?NO:3作比對;

7)若比對結果表明,待測菌株ITS序列與SEQ?ID?NO:3的內容和排列順序完全一致,則待測菌株就是蟬棒束孢CGMCC?NO.3453菌株。

2.如權利要求1所述蟬棒束孢菌株CGMCC?NO.3453的分子鑒定方法,其特征在于,步驟2)所述PCR擴增體系為:每20ul反應體系,內含1×EX?PCR緩沖液、1.5mMdNTP、正反向引物各10pmol、EX?Tag酶1u和DNA樣本200ng及加ddH2O至20μl。

3.如權利要求1所述蟬棒束孢菌株CGMCC?NO.3453的分子鑒定方法,其特征在于,步驟2)所述PCR擴增條件為:94℃3分鐘為1個循環;而后94℃30秒,55℃30秒,72℃40秒為38個循環;最后72℃7分鐘延伸。

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