[發明專利]臍帶間充質干細胞數字化自動生產方法

有效

• 申請號: 201110176693.6
• 申請日: 2011-06-28
• 公開（公告）號: CN102250837A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 楊兵;李偉
• 申請（專利權）人: 江蘇省北科生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

????本發明屬細胞培養與細胞工程領域，涉及臍帶間充質干細胞數字化自動生產方法。

背景技術

傳統的細胞培養，大都是人工操作，對生產的各個方面有諸多的限制，比如人員素質、潔凈工作室級別、操作管理規章制度等。盡管具備了嚴格化的生產管理及完善的質量控制，諸多人為因素對干細胞生產的影響也是不可避免的，細胞的質量及穩定性仍然不能保證。目前，生物反應器在國內外諸如疫苗生產的細胞規模生產領域已經廣泛開展起來，它可以有效地提高細胞及相關產物的生產效率并減小細胞生產的風險。然而，生物反應器尚未成熟的應用到間充質干細胞，主要原因是：1.此項技術條件較高，需要選用合適的載體以使細胞貼附并在立體失重的環境下培養；2.立體失重的細胞培養環境同傳統的靜止培養有諸多的不同，因此生產出的細胞質量尚不可知，這對間充質干細胞的臨床應用也存在一定的風險；3.實踐中為了保證間充質干細胞臨床應用的療效和安全性，并不允許長時間擴增，也無需太多的細胞，這也限制了傳統的大規模生產細胞的生物反應器的應用。

發明內容

為了解決現有技術中人工培養細胞費時費力、細胞培養穩定性差、成本高、效率低等不足，本發明提供了一種臍帶間充質干細胞數字化自動生產方法，應用于細胞的自動化、流水線培養，減少了人工操作影響因素，確保細胞培養的質量及穩定性，節約細胞培養成本，提高細胞培養效率。

本發明采用的技術方案是：一種臍帶間充質干細胞數字化自動生產方法，包括以下步驟：

(1)將無菌采集的臍帶剪成1mm³的組織塊，組織塊經培養液重懸后經第一培養瓶的組織塊添加接口A2加入，然后關閉組織塊添加接口A2，系統進入細胞培養狀態，生物反應器的探測裝置對培養過程的各項參數進行探測；

(2)生物反應器控制供氣裝置使細胞生長過程中CO₂的濃度始終保持在5%，并保持培養瓶氣壓恒定；當培養液中營養物質消耗過多，生物反應器和機械流水線協同操作換液如下：第一培養瓶即原代組織塊培養瓶受控振蕩10秒鐘后翻轉倒置，培養液由去液接口A3排除，第一培養瓶受控翻轉正置，經加液接口A1補充新的培養液；

(3)機械流水線保持第一培養瓶中細胞培養溫度37℃恒定，并定期微小振蕩，保證原代細胞貼壁均一；

(4)生物反應器的探測裝置通過探測各項關鍵參數變化趨勢，分析、判斷出第一培養瓶中的細胞生長狀況，并計算出細胞傳代的時間，細胞消化所需的各種液體的量；

(5)至細胞傳代時，第一培養瓶受控翻轉倒置，培養液由去液接口A3排除，第一培養瓶受控翻轉正置，經加液接口A1補充生理鹽水，機械流水線振蕩使第一培養瓶洗滌10秒鐘，第一培養瓶受控翻轉倒置，生理鹽水由去液接口A3排除，第一培養瓶受控翻轉正置，再經加液接口A1補充細胞消化所需的酶，機械流水線振蕩培養瓶37℃消化5分鐘，第一培養瓶受控翻轉呈90度豎直，使細胞懸液經收集接口A4轉移至第二培養瓶的細胞添加接口B2，第一培養瓶受控翻轉正置，再經加液接口A1補充少量培養液，機械流水線振蕩培養瓶10秒鐘，第一培養瓶受控翻轉呈90度豎直，使殘留細胞懸液經收集接口A4轉移至第二培養瓶的細胞添加接口B2；

(6)第一培養瓶受控復位，經加液接口A1補充培養液，瓶中原代組織塊繼續培養；

(7)第二培養瓶受控側翻90度后迅速正置以保證各細胞培養層液體分布均勻，靜置培養12小時使細胞貼壁，第二培養瓶受控側翻90度后停留5秒鐘后緩慢倒置，培養液經去液接口B3排除，第二培養瓶受控翻轉正置，生理鹽水經加液接口B1加入，第二培養瓶受控側翻90度后迅速正置，機械流水線振蕩洗滌10秒鐘，第二培養瓶受控側翻90度后停留5秒鐘后緩慢倒置，生理鹽水由去液接口B3排除，第二培養瓶受控翻轉正置，經加液接口B1補加新的培養液，第二培養瓶受控側翻90度后迅速正置后靜置培養；探測裝置通過探測各項關鍵參數變化趨勢，分析、判斷出第二培養瓶中細胞生長狀況，并計算出細胞傳代的時間和細胞消化所需的各種液體的量；