[發(fā)明專利]一種頭孢西酮鈉雜質(zhì)及中間體毒性的檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110175002.0
• 申請日: 2011-06-27
• 公開（公告）號: CN102288735A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 崔連泉;劉文玖;林瀾;蘇秋菊;張夢云
• 申請（專利權(quán)）人: 天津新豐制藥有限公司
• 主分類號: G01N33/15
• 分類號: G01N33/15;G01N30/02
• 代理公司: 天津盛理知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12209
• 代理人: 王來佳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及化學(xué)藥物毒性檢測領(lǐng)域，尤其是一種頭孢西酮鈉雜質(zhì)毒性的毒性檢測方法。

背景技術(shù)

頭孢西酮鈉，英文名稱：Cefazedone?Sodium?for?Injection，類別：β-內(nèi)酰胺類抗生素，頭孢菌素類，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

頭孢西酮鈉是由E.Merck，Darmstadt實驗室研究開發(fā)的一代頭孢菌素，1979年由E.默克公司率先在德國上市，其后在其周邊及韓國、羅馬尼亞、保加利亞、臺灣等國家和地區(qū)上市。頭孢西酮鈉對金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、肺炎鏈球菌、β-溶血鏈球菌、流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌、不產(chǎn)ESBL的大腸埃希菌和肺炎克雷白桿菌、奇異變形桿菌等有抑制效果。用于呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、胃腸道感染及婦科、腹膜、皮膚、軟組織和整形外科感染的治療，具有藥效相對較高，毒性相對較小，血藥濃度維持時間長的優(yōu)勢。

根據(jù)目前國內(nèi)外耐藥監(jiān)測資料以及臨床醫(yī)師的實際應(yīng)用情況，一代頭孢菌素在治療國內(nèi)社區(qū)獲得性感染，特別是呼吸道感染中革蘭陽性菌以及流感嗜血桿菌仍有重要的地位，對門診患者的有效率可達到79％以上，因此本品在基層醫(yī)療機構(gòu)有著廣闊的應(yīng)用空間。

其次，隨著醫(yī)療體制改革深化，社區(qū)醫(yī)療在醫(yī)療服務(wù)中的比例逐漸增加，國家提倡基本藥物治療，提倡抗菌藥分級使用，充分肯定一代頭孢菌素對社區(qū)感染和圍手術(shù)期預(yù)防的應(yīng)用，臨床上可供選擇的一代頭孢品種相對較少，需要新品種，而頭孢西酮鈉的抗菌譜和抗菌活性與頭孢唑林相似，藥代特征與其它同類產(chǎn)品相比具有一定優(yōu)勢，具有開發(fā)的必要性。

安全性評價是新藥研發(fā)過程中最重要的研究內(nèi)容之一。藥物毒副反應(yīng)一般來自藥品本身的藥理活性和藥品中雜質(zhì)的活性。藥品本身的毒理活性通常通過嚴格的藥理實驗進行評估；而藥品中的雜質(zhì)由于通常幾乎不可能完全被去除，故通常通過限度來控制。由于藥品中的雜質(zhì)通常不宜獲得，因此很難依據(jù)傳統(tǒng)的藥理實驗進行評估。

目前斑馬魚作為一種新的優(yōu)秀動物模型已愈來愈多的受到關(guān)注，斑馬魚作為藥物毒理學(xué)評價的模式動物具有：①本身為脊椎動物，與人在基因序列、表達規(guī)律以及組織器官的形成發(fā)育過程相似，可以較好地模擬人類胚胎的體內(nèi)發(fā)育；其組織器官在解剖學(xué)、生理學(xué)和分子水平上也類似于人類的相應(yīng)器官。研究表明，哺乳動物90％以上的基因在斑馬魚中具有同源基因，所編碼蛋白結(jié)構(gòu)相似而且在生物體內(nèi)發(fā)揮類似的功能；斑馬魚基因組測序工作預(yù)計在1-2年內(nèi)完成，在生物信息學(xué)上可與人和小鼠進行比較；因此，以斑馬魚為平臺的藥物毒理學(xué)研究和檢測具有較好的代表性和可比性。②斑馬魚可以生存在較小的容器和少量的液體中，通常只需要微克級的化合物便可進行藥物毒性篩選，如采用受精卵作為評價對象，實驗樣品量可進一步降低，因此特別適合對不宜獲得大量樣品的雜質(zhì)的評價；③斑馬魚具有較高的產(chǎn)卵量(一對成體魚可以在一個上午產(chǎn)數(shù)百枚受精卵)，可以滿足統(tǒng)計學(xué)對實驗的要求；④斑馬魚的世代周期較短(3-4月)，體外發(fā)育迅速(3天完成胚胎的全部發(fā)育)且胚體透明，便于隨時觀察活體胚胎結(jié)構(gòu)，因此適和于快速分析藥物對胚胎的多方面的作用，大大提高檢測效率；等其他哺乳類模式動物不可及的優(yōu)點。

目前關(guān)于頭孢西酮鈉雜質(zhì)的檢測方法沒有明確一個規(guī)定，每個廠家執(zhí)行的標準也不相同，絕大多數(shù)廠家根本不進行雜質(zhì)毒性的研究，無論對頭孢西酮鈉的生產(chǎn)還是貯藏都是十分不利的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在提供一種頭孢西酮鈉雜質(zhì)毒性的毒性檢測方法，頭孢西酮鈉由于本身結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，故樣品中的雜質(zhì)含量相對較高，為評價其雜質(zhì)限度是否合理，我們利用斑馬魚模型對其毒性作用進行了評估。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

一種頭孢西酮鈉雜質(zhì)毒性的毒性檢測方法，采用斑馬魚TU?line?Zebrafish，Danio?rerio?Tuebingen作為藥物毒理學(xué)評價的動物模型。

而且，步驟為：(1)用人工海水分別稀釋供試品溶液，稀釋成不同梯度；

(2)選擇頭孢唑林鈉為對照樣品；

(3)取40-50％外包期胚胎，浸入3-4ml測試藥液中，以斑馬魚飼養(yǎng)液-人工海水為正常對照液，標準環(huán)境下孵育，持續(xù)3天以上，每天觀察記錄胚胎發(fā)育情況，包括統(tǒng)計發(fā)育第3天的畸形和死亡數(shù)/存活胚數(shù)，直至實驗結(jié)束。

而且，所述頭孢西酮鈉雜質(zhì)包括的制備頭孢西酮鈉的中間體、制備過程中產(chǎn)生的雜質(zhì)以及降解產(chǎn)生的雜質(zhì)。

而且，所述頭孢西酮鈉雜質(zhì)包括：