[發明專利]一種從血漿分離組分Ⅰ+Ⅲ中純化人免疫球蛋白的方法

有效

• 申請號: 201110174857.1
• 申請日: 2011-06-27
• 公開（公告）號: CN102250240A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 馬山;邵玉娟;師秀梅;菅長永;李斌;高亞朋;高建鋒;高超;鞏艷艷;朱孟沼
• 申請（專利權）人: 山東泰邦生物制品有限公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/18
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 辛向東

1.一種從血漿分離組分Ⅰ+Ⅲ中純化人免疫球蛋白的方法，其特征在于用辛酸沉淀組分Ⅰ+Ⅲ中的非IgG雜蛋白，結合一步陰離子交換層析技術，分離純化人免疫球蛋白IgG。

2.根據權利要求1所述的一種從血漿分離組分Ⅰ+Ⅲ中純化人免疫球蛋白的方法，其特征在于分離純化步驟包括：將組分Ⅰ+Ⅲ沉淀用醋酸醋酸鈉緩沖液充分溶解；用正辛酸沉淀，去除脂質及部分雜蛋白，制備IgG；采用陰離子交換柱層析獲得高純IgG；過濾濃縮，配制，除菌，分裝。

3.根據權利要求2所述的一種從血漿分離組分Ⅰ+Ⅲ中純化人免疫球蛋白的方法，其特征在于溶解組分Ⅰ+Ⅲ沉淀的醋酸醋酸鈉緩沖液含量為0.02mol/L，離子強度為1.4mS/cm，pH至4.5；醋酸醋酸鈉緩沖液的用量為組分Ⅰ+Ⅲ沉淀重量的3倍。

4.根據權利要求2所述的一種從血漿分離組分Ⅰ+Ⅲ中純化人免疫球蛋白的方法，其特征在于用正辛酸沉淀非IgG的雜蛋白過程中，采用噴淋方式加入正辛酸，同時快速攪拌，使溶解液中的正辛酸均勻分布；加入正辛酸的速度為20ml/min；溶液中正辛酸的終濃度為90-110mmol/L。

5.根據權利要求2所述的一種從血漿分離組分Ⅰ+Ⅲ中純化人免疫球蛋白的方法，其特征在于所說的陰離子交換柱層析所選用的陰離子凝膠特點為：強陰離子交換Q季銨乙基基團，基質為交聯瓊脂糖凝膠，粒徑為120~165um；僅采用一步陰離子交換柱層析完成純化；層析過程中，最佳流穿流速為1~2cm/min。

6.根據權利要求2所述的一種從血漿分離組分Ⅰ+Ⅲ中純化人免疫球蛋白的方法，其特征在于所說的層析純化蛋白的操作過程如下：首先將陰離子交換層析柱用pH5.6的0.02mol/L?醋酸鈉緩沖液平衡3個柱體積，然后將樣品上柱，流速為1~2cm/min，使大分子的雜質結合到柱子上，收集流穿液，將結合在層析介質上的雜質蛋白用2mol/L?NaCl洗脫處理5個柱體積，使交換介質再生，用注射用水處理2個柱體積，用0.1mol/L?NaOH沖洗2個柱體積，再次用注射用水處理2個柱體積，最后用20%乙醇保存。

7.根據權利要求1或2所述的一種從血漿分離組分Ⅰ+Ⅲ中純化人免疫球蛋白的方法，其特征在于包括以下具體操作步驟：

a.?組分Ⅰ+Ⅲ沉淀的溶解：將沉淀用pH為4.3~5.0的0.02mol/L的醋酸醋酸鈉緩沖液攪拌充分溶解；緩沖液用量為組分Ⅰ+Ⅲ沉淀重量的3倍；

b.?正辛酸沉淀制備IgG：上述溶解液中加入0.3mol/L?NaOH溶液，調pH至4.5±0.05，攪拌1小時混勻后，以20ml/min的速度、噴淋方式緩慢加入正辛酸，同時快速攪拌，使溶解液中的正辛酸能均勻分布，至溶液中正辛酸的終濃度為90~110mmol/L時停止加入辛酸，快速攪拌2小時，沉淀非IgG的雜蛋白，同時滅活脂包膜病毒；

c.上陰離子交換柱層析獲得高純IgG：將上述步驟溶液離心或壓濾，去除沉淀，留取上清液；上清液用0.3mol/L?NaOH調整pH至5.4~6.0，經0.2um濾器過濾后，上預先平衡的陰離子交換層析柱，進一步純化分離；

d.?收集流穿液，納米膜過濾，超濾濃縮，配制，除菌，分裝：上述流穿液用0.3mol/L?HCl調整pH至4.0~4.5，經預過濾后，進行納米膜過濾，除去包括細小病毒在內的潛在病毒；過濾后制品用0.01mol/L醋酸溶液進行超濾脫鹽，使制品pH維持在4.0~4.5，電導率小于1mS/cm后，進行濃縮，達到蛋白含量50g/L以上，加入0.2mol/L甘氨酸作為保護劑，除菌、分裝。