[發明專利]快速檢測肌鈣蛋白I的膠體金試紙及其制備方法

有效

• 申請號: 201110174611.4
• 申請日: 2011-06-24
• 公開（公告）號: CN102841208A
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發明（設計）人: 余占江;胡光宇;王長青;張芳
• 申請（專利權）人: 北京樂普醫療科技有限責任公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/532
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王加嶺;張慶敏

技術領域

本發明涉及臨床免疫學檢測領域，具體涉及一種快速檢測肌鈣蛋白I膠體金試紙條及其制備方法。

背景技術

心肌梗死是全球范圍內致死和致殘的主要疾病之一。全球每年有1700萬人死于心血管疾病，其中一半以上死于急性心肌梗死(AMI)。在中國，冠心病患者超過2千萬人，而每年有超過100萬人被急性心肌梗死奪去生命。因此，快速識別出早期急性心肌梗死患者并及時治療是提高其存活率的關鍵。對于無典型胸痛和心電圖改變的AMI患者，檢測血清心肌標志物是診斷AMI的必要依據。以往世界衛生組織(WHO)定義的心梗標準包括缺血癥狀、心電圖(ECG)異常改變和血清心肌酶學變化。然而隨著敏感性和特異性更高的生化標志物——肌鈣蛋白(cTn)的發現以及更精確的無創影像學技術的發展，使得檢測到更小的心梗病灶成為可能。診斷心肌梗死的重要一條就是如何快速準確檢測體內心臟生化標志物的水平。選擇特異性的心肌梗死生化標志物和選擇特異性高靈敏度的方法檢測心肌梗死生化標志物水平(免疫診斷試劑盒)是快速診斷急性心肌梗死首先需要解決的問題。因此，各種以心肌梗死心臟標志物為檢測對象的免疫診斷試劑盒和生物芯片逐漸應用于臨床并得到廣泛發展。

心肌肌鈣蛋白(cTn)靈敏度高、特異性強、發病后持續時間長，幾乎完全具有心肌組織特異性并具有高度敏感性，因此是評價心肌壞死的首選標志物。即使心肌組織發生微小區域的壞死也能檢查到cTn的升高。cTn的升高對于診斷急性心肌梗死至關重要。目前cTn主要用于心肌缺血損傷的臨床診斷、危險性估計和預后判斷，此外還可用于MI后臨床溶栓治療效果判定；心肌缺血損傷面積的估計、臨床診斷心肌炎、心肌創傷(心臟手術)、圍手術期心臟并發癥、嚴重膿毒血癥或膿毒血癥導致的左心衰竭、充血性心功能不全，以及某些治療藥物的臨床療效觀察等。因此，如何快速、特異性、高靈敏度的檢測體內肌鈣蛋白的水平對于心肌梗死患者的診斷和治療具有重要的意義，具有廣泛的臨床應用前景和市場潛力。

目前肌鈣蛋白檢測主要采用金標免疫法、酶聯免疫法、化學發光法、酶聯熒光分析法(ELFA)等方法。金標免疫法由于標本用量少，簡便快速，適合于急性心肌梗死(AMI)的床旁檢測，不受時間、地點限制，24h全方位為患者服務，在臨床廣泛應用，但是膠體金試紙條檢測靈敏度低，一般情況最低檢出限為1ng/mL。大量臨床試驗和循證醫學證據表明，心肌肌鈣蛋白作為心肌梗死的標志物具有非常高的靈敏度和特異性，在正常人體中用現有的檢測方法幾乎檢測不出肌鈣蛋白的含量，至少其在正常人體的含量低于0.1ng。臨床廣泛應用的金標免疫法作為心肌梗死檢測的重要手段，其靈敏度的局限性制約了進一步的更廣泛應用。因此，提高膠體金檢測靈敏度作為快速診斷的一個重要方向受到越來越多的重視。如將生物素-親和素放大系統、膠體金與熒光結合等技術應用于膠體金試紙的檢測，以實現更精確的檢測。

發明內容

為了解決上述問題，本發明的目的在于提供一種快速檢測肌鈣蛋白I膠體金試紙條及其制備方法。

本發明提供的快速檢測肌鈣蛋白I膠體金試紙條，其包括包被膜、噴涂有膠體金標記的抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體的膠體金墊1、噴涂有膠體金標記的抗BSA單克隆抗體或抗PEG單克隆抗體的膠體金墊2、樣品墊、吸水墊和底板，所述的包被膜涂覆有抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體檢測線和兔抗鼠抗體質控線。

其中，所述的膠體金墊1噴涂有10nm～100nm的膠體金標記的抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體。所述的抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體的量為1～50μg。

其中，所述的膠體金標記的抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體為膠體金標記的抗心肌肌鈣蛋白I的單克隆抗體或多克隆抗體。更進一步，所述的膠體金標記的抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體用BSA或PEG封閉。

其中，所述的膠體金墊2噴涂有20nm～100nm膠體金標記的抗BSA單克隆抗體或抗PEG單克隆抗體。所述的抗BSA單克隆抗體或抗PEG單克隆抗體的量為1～50μg。

其中，所述的包被膜為硝酸纖維素膜；所述的膠體金墊1、膠體金墊2和樣品墊為聚酯膜或玻璃纖維素膜。