[發明專利]低分子水產膠原蛋白肽的制備方法

無效

• 申請號: 201110174558.8
• 申請日: 2011-06-24
• 公開（公告）號: CN102260727A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發明（設計）人: 申鉉日
• 申請（專利權）人: 申鉉日
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K2/00;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16
• 代理公司: 西安弘理專利事務所 61214
• 代理人: 李娜

技術領域

本發明涉及蛋白肽提取技術領域，具體涉及一種低分子水產膠原蛋白肽的制備方法。

背景技術

膠原蛋白是人體內含量最多、分布最廣的蛋白質，是結締組織的主要蛋白質成分，約占機體總蛋白的25％，它主要分布在動物的皮膚，骨，軟骨，角膜，血管內壁等組織內。動物的結締組織中提取的膠原蛋白，因具有特殊的蛋白質結構和身體親和性，廣泛應用于食品，化妝品和醫療等與人體健康相關的行業。目前工業生產中使用的膠原蛋白主要是I型膠原蛋白，它是由3條1000個氨基酸肽鏈組成的高分子硬蛋白，人們直接食用高分子膠原蛋白很難消化吸收，將膠原水解為小分子肽，消化吸收率就會大大提高。另外，近年來人們發現，經蛋白質水解反應獲得的小分子膠原蛋白肽具有美容護膚、抗高血壓、胃粘膜保護、預防和抑制關節炎、骨質疏松癥等諸多生理功能。低分子膠原蛋白的制備可采用物理、化學或生物學方法，由于采用單一方法水解膠原蛋白效果并不理想，所以常采用兩種或兩種以上并用的方法。但，采用強酸、強堿等化學方法水解膠原蛋白時，水解反應難以調控，難以獲得分子量較均一的膠原蛋白肽。另外大量使用化學物質，影響食品安全性的同時造成嚴重的環境污染；物理方法由于水解效果不如化學法和生物法，所以一般作為生物水解法的輔助方法來使用；利用工業酶水解膠原蛋白的生物學水解方法，由于效率高、容易控制反應、具有酶解特異性等特點廣泛應用于工業化生產中。但使用一種酶水解膠原蛋白，很難獲得低分子膠原蛋白，所以使用復合酶酶解膠原蛋白是制備低分子膠原蛋白的有效途徑。雖然目前有利用復合酶酶解膠原蛋白獲得低分子膠原肽的報導，但常用的復合酶法酶解膠原蛋白獲得的低分子膠原蛋白肽，出現分子量分布不集中或低分子膠原蛋白肽中氨基酸含量過高的現象。結果為了獲得均一的低分子組分，增加低孔徑超濾膜或色譜分離等分離設備，導致生產成本提高，得率下降的現象。

發明內容

本發明的目的是提供一種低分子水產膠原蛋白肽的制備方法，不僅可從魚鱗中獲得高含量低分子組分膠原蛋白肽，而且去除影響膠原蛋白產品外觀的色素類物質，減輕膠原蛋白特有的魚腥魚臭味，提高了魚類膠原蛋白產品的產品價值。

本發明所采用的技術方案是，一種低分子水產膠原蛋白肽的制備方法，按以下步驟進行：

步驟1，魚鱗脫灰：

選取干魚鱗，清洗，在常溫條件下，用濃度為4％-35％的鹽酸浸泡攪拌10～50min，進行脫灰，然后用蒸餾水反復清洗，除去魚鱗表面附著的鹽酸、磷和鈣，得到脫灰的魚鱗；

步驟2，利用熱水浸提制備水溶性膠原蛋白：

取蒸餾水反復清洗脫灰的魚鱗，當清洗液的pH值為6.2～7.0時停止清洗；將魚鱗瀝干水分，用當量濃度為0.1N的氫氧化鈉溶液對魚鱗脫脂8～24h，然后取蒸餾水反復清洗魚鱗，當清洗液的pH值為7.0～8.0停止清洗；將清洗后的魚鱗放入蒸餾水中，控制脫灰、脫脂后的魚鱗與蒸餾水的重量比為1∶5～8，然后在90℃～125℃溫度下熱水浸提1～3h，過濾，回收濾液，濾液為水溶性膠原蛋白；

步驟3，制備堿性酶酶解蛋白肽溶液：

分別取氫氧化鈉溶液和堿性蛋白酶，將氫氧化鈉溶液加入步驟2得到的水溶性膠原蛋白溶液中，調節該水溶性膠原蛋白溶液的pH值為9～11，再往水溶性膠原蛋白溶液中加入堿性蛋白酶，控制溶液中堿性蛋白酶的基質比為0.5％～2％，并在30～60℃的溫度下，攪拌酶解8～48小時，接著在98℃～115℃溫度下加熱10分鐘～15分鐘，使堿性蛋白酶失去活性，制得堿性酶酶解蛋白肽溶液；

步驟4，制備中性酶酶解蛋白肽溶液：

分別取鹽酸溶液和中性蛋白酶，將鹽酸溶液加入步驟3得到的堿性酶酶解蛋白肽溶液中，調節該蛋白肽溶液的pH值為6.5～8，再往該蛋白肽溶液中加入中性蛋白酶，控制蛋白肽溶液中的中性蛋白酶的基質比為0.5％～2％，并在40～55℃的溫度下，攪拌酶解8～48小時，接著在98℃～115℃溫度下加熱10分鐘～15分鐘，使中性蛋白酶失去活性，制得中性酶酶解蛋白肽溶液；

步驟5，制備酸性酶酶解蛋白肽溶液：

分別取鹽酸溶液和酸性蛋白酶，將鹽酸溶液加入步驟4得到的中性酶酶解蛋白肽溶液中，調節該蛋白肽溶液的pH值為2.5～5.0；再往該蛋白肽溶液中加入酸性蛋白酶，控制蛋白肽溶液中酸性蛋白酶的基質比為0.5％～2％，并在30～55℃的溫度下攪拌酶解8～48小時，接著在98℃～115℃溫度下加熱10分鐘～15分鐘，使酸性蛋白酶失去活性，制得酸性酶酶解蛋白肽溶液；

步驟6，活性炭過濾進行脫色、脫腥：