[發明專利]低分子水產膠原蛋白肽的制備方法

無效

• 申請號: 201110174558.8
• 申請日: 2011-06-24
• 公開（公告）號: CN102260727A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發明（設計）人: 申鉉日
• 申請（專利權）人: 申鉉日
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K2/00;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16
• 代理公司: 西安弘理專利事務所 61214
• 代理人: 李娜

1.一種低分子水產膠原蛋白肽的制備方法，其特征在于，按以下步驟進行：

步驟1，魚鱗脫灰：

選取干魚鱗，清洗，在常溫條件下，用濃度為4％-35％的鹽酸浸泡攪拌10～50min，進行脫灰，然后用蒸餾水反復清洗，除去魚鱗表面附著的鹽酸、磷和鈣，得到脫灰的魚鱗；

步驟2，利用熱水浸提制備水溶性膠原蛋白：

取蒸餾水反復清洗脫灰的魚鱗，當清洗液的pH值為6.2～7.0時停止清洗；將魚鱗瀝干水分，用當量濃度為0.1N的氫氧化鈉溶液對魚鱗脫脂8～24h，然后取蒸餾水反復清洗魚鱗，當清洗液的pH值為7.0～8.0停止清洗；將清洗后的魚鱗放入蒸餾水中，控制脫灰、脫脂后的魚鱗與蒸餾水的重量比為1∶5～8，然后在90℃～125℃溫度下熱水浸提1～3h，過濾，回收濾液，濾液為水溶性膠原蛋白；

步驟3，制備堿性酶酶解蛋白肽溶液：

分別取氫氧化鈉溶液和堿性蛋白酶，將氫氧化鈉溶液加入步驟2得到的水溶性膠原蛋白溶液中，調節該水溶性膠原蛋白溶液的pH值為9～11，再往水溶性膠原蛋白溶液中加入堿性蛋白酶，控制溶液中堿性蛋白酶的基質比為0.5％～2％，并在30～60℃的溫度下，攪拌酶解8～48小時，接著在98℃～115℃溫度下加熱10分鐘～15分鐘，使堿性蛋白酶失去活性，制得堿性酶酶解蛋白肽溶液；

步驟4，制備中性酶酶解蛋白肽溶液：

分別取鹽酸溶液和中性蛋白酶，將鹽酸溶液加入步驟3得到的堿性酶酶解蛋白肽溶液中，調節該蛋白肽溶液的pH值為6.5～8，再往該蛋白肽溶液中加入中性蛋白酶，控制蛋白肽溶液中的中性蛋白酶的基質比為0.5％～2％，并在40～55℃的溫度下，攪拌酶解8～48小時，接著在98℃～115℃溫度下加熱10分鐘～15分鐘，使中性蛋白酶失去活性，制得中性酶酶解蛋白肽溶液；

步驟5，制備酸性酶酶解蛋白肽溶液：

分別取鹽酸溶液和酸性蛋白酶，將鹽酸溶液加入步驟4得到的中性酶酶解蛋白肽溶液中，調節該蛋白肽溶液的pH值為2.5～5.0；再往該蛋白肽溶液中加入酸性蛋白酶，控制蛋白肽溶液中酸性蛋白酶的基質比為0.5％～2％，并在30～55℃的溫度下攪拌酶解8～48小時，接著在98℃～115℃溫度下加熱10分鐘～15分鐘，使酸性蛋白酶失去活性，制得酸性酶酶解蛋白肽溶液；

步驟6，活性炭過濾進行脫色、脫腥：

取酸性酶酶解蛋白肽溶液質量1～5％的食品用粉末狀活性碳，加入步驟5得到的酸性酶酶解蛋白肽溶液中，攪拌均勻，加熱至40～80℃的條件下，保溫30～60min，然后真空過濾，獲得澄清的膠原蛋白濾液；

步驟7，大孔樹脂處理進一步脫色：

取大孔樹脂用乙醇溶液浸泡24h，然后用蒸餾水反復清洗，再用蒸餾水浸泡，確認無殘留乙醇后，將大孔樹脂添加到分離柱中，接著將步驟6得到的膠原蛋白濾液按100ml/h·60dm³樹脂～250ml/h·60dm³樹脂的流速通過大孔樹脂分離柱，除去活性碳難以吸附的殘留色素，回收分離液，將分離液經0.45μm膜過濾后，再用截流分子量5000Da的超濾膜過濾，回收濾液，濾液為澄清透明的酶解蛋白肽脫色溶液；

步驟8，制得膠原蛋白肽：

將步驟7制得的酶解蛋白肽脫色溶液，進行噴霧干燥，制得高白度的膠原蛋白肽。

2.根據權利要求1所述的低分子水產膠原蛋白肽的制備方法，其特征在于：所述堿性蛋白酶為Bacillus?subtirus、Aspergillus?melleus或Bacillus?licheniformis微生物來源的堿性蛋白酶。

3.根據權利要求1所述的低分子水產膠原蛋白肽的制備方法，其特征在于：所述中性蛋白酶為Bacillus?subtilis、Bacilluse?Stearothermophi、Aspergillus?oryzae、Bacillus?amyloliquefaciens、木瓜酶或胰腺酶的微生物和動、植物來源酶。

4.根據權利要求1所述的低分子水產膠原蛋白肽的制備方法，其特征在于：所述酸性蛋白酶為Aspergillus?niger或Rhizopus?niveus的微生物來源酶或動物胃蛋白酶。

5.根據權利要求1所述的低分子水產膠原蛋白肽的制備方法，其特征在于：所述步驟1中，利用氫氧化鈉溶液對魚鱗進行脫脂的具體方法為：將脫灰濕魚鱗放入當量濃度為0.1N的氫氧化鈉溶液中，用攪拌器以60轉/分的轉速攪拌8-24h，除去魚鱗的脂肪和雜蛋白；其中，1.5ml當量濃度為0.1N的氫氧化鈉溶液中加入0.258g脫灰濕魚鱗。