[發明專利]一種甲胎蛋白的均相時間分辨熒光分析方法

有效

• 申請號: 201110174552.0
• 申請日: 2011-06-25
• 公開（公告）號: CN102353790A
• 公開（公告）日: 2012-02-15
• 發明（設計）人: 劉天才;李明;吳英松
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N21/64
• 代理公司: 廣州市天河廬陽專利事務所 44244
• 代理人: 胡濟元

1.一種甲胎蛋白的均相時間分辨熒光分析方法，該方法由以下步驟組成：

(a)定量標準曲線制備：將HFRFA能量受體、HFRFA能量供體和甲胎蛋白標準品一起孵育，進行均相時間分辨熒光檢測和分析，得到甲胎蛋白濃度與熒光值的標準曲線；

(b)樣品檢測：將HFRFA能量受體、HFRFA能量供體和待測甲胎蛋白樣品一起孵育，進行均相時間分辨熒光檢測和分析，將檢測樣品得到的熒光值與步驟(a)得到的標準曲線比較計算待測甲胎蛋白樣品濃度；

其中，

所述的HFRFA能量受體由以下方法制備得到：

(I)將水溶性量子點、物質的量為水溶性量子點0.02倍的三辛基膦和CPs納米乳膠球加入熱溶脹劑中，用0.1MNaOH調整溶液pH為9，其中水溶性量子點濃度為0.25μM，CPs納米乳膠球濃度為2mg/mL；在105度下反應30min，冷卻到室溫，離心沉淀分離得到量子點納米乳膠球；所述的熱溶脹劑由苯甲醇，乙二醇和水組成，三者之間的體積比為苯甲醇∶乙二醇∶水＝1∶1.4∶0.15；

(II)將分子量為100kDa的氨基化葡聚糖水溶膠在1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽作用下與量子點納米乳膠球偶聯，透析分離，得到量子點納米水溶膠；

(III)在1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽作用下將量子點納米水溶膠與甲胎蛋白抗原的單克隆抗體E010偶聯，得到HFRFA能量受體；

所述的HFRFA能量供體由以下方法制備得到：將稀土金屬鋱螯合物與待測抗原的單克隆抗體E014偶聯，得到HFRFA能量供體。

2.根據權利要求1所述的一種甲胎蛋白的均相時間分辨熒光分析方法，其特征在于，所述的水溶性量子點由以下方法制備得到：將巰基丁二酸和Invitrogen公司的核/殼型硒化鎘/硫化鋅量子按照摩爾比為1000∶15加入三氯甲烷中，混合均勻后加入氫氧化鈉調整pH為9，室溫反應2小時；反應結束后加入去離子和丙酮，沉淀，離心，即得。