[發(fā)明專利]一種通過同源重組敲除manX的高產(chǎn)氨基葡萄糖工程菌及其構(gòu)建方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110174246.7 | 申請日： | 2011-06-27 |
| 公開（公告）號： | CN102286420A | 公開（公告）日： | 2011-12-21 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 陳堅;堵國成;劉龍;李江華;陳欣;何菊 | 申請（專利權(quán)）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/52;C12N15/60;C12N15/63;C12N15/09;C12R1/19 |
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| 地址： | 214122 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 通過 同源 重組 manx 高產(chǎn) 氨基 葡萄糖 工程 及其 構(gòu)建 方法 | ||
1.一種氨基葡萄糖基因工程菌，是克隆E.coli?BL21(DE3)基因組中氨基葡萄糖合成酶glmS基因和釀酒酵母S.cerevisiae?S288C基因組中氨基葡萄糖乙酰化酶gna1基因，同時敲除乙酰氨基葡萄糖磷酸轉(zhuǎn)運系統(tǒng)nagE基因和甘露糖磷酸轉(zhuǎn)移系統(tǒng)manX基因構(gòu)建而成的重組大腸桿菌。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述基因工程菌，其特征在于，所述氨基葡萄糖合成酶的基因來源于GenBankNo.CP001509.3基因組中g(shù)lmS片斷，氨基葡萄糖乙酰化酶gna1基因來源于GenBank?NC_001138。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述基因工程菌，其特征在于，將氨基葡萄糖合成酶編碼基因glmS和氨基葡萄糖乙酰化酶編碼基因gna1連接到載體pET-28a(+)上。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述基因工程菌，其特征在于，大腸桿菌為E.coli?ATCC?25947。
5.一種權(quán)利要求1所述基因工程菌的構(gòu)建方法，具體步驟如下：
1)用限制性內(nèi)切酶Sac?I和Hind?Ⅲ對glmS基因片斷和pET-28a(+)進行酶切，并通過連接反應將glmS基因片斷插入質(zhì)粒pET-28a(+)的Sac?I和Hind?Ⅲ位點之間；
2)用限制性內(nèi)切酶NotI和Xho?I對gna1基因片斷和pET-28a(+)進行酶切，并通過連接反應將gna1基因片斷插入質(zhì)粒pET-28a(+)的Not?I和Xho?I位點之間得到重組質(zhì)粒pET-28a(+)-glmS-gna1；
3)敲除重組菌E.coli?ATCC?25947基因組中nagE和manX基因片段，得到nagE和manX基因失活的菌株E.coli-ΔnagE-ΔmanX；
4)將質(zhì)粒pET-28a(+)-glmS-gna1轉(zhuǎn)化E.coli-ΔnagE-ΔmanX，得到基因工程菌E.coli-glms-gna1-ΔnagE-ΔmanX。
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