[發(fā)明專利]固態(tài)發(fā)酵矛尾刺蝦虎魚肌肉蛋白制備抗氧化多肽的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110171920.6
• 申請日: 2011-06-23
• 公開（公告）號: CN102251002A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 房耀維;劉姝;王淑軍;呂明生;焦豫良
• 申請（專利權(quán)）人: 淮海工學(xué)院
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C12R1/69
• 代理公司: 南京眾聯(lián)專利代理有限公司 32206
• 代理人: 劉喜蓮

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種固態(tài)發(fā)酵矛尾刺蝦虎魚肌肉蛋白制備抗氧化多肽的方法，屬于水產(chǎn)品加工及微生物生物技術(shù)交叉領(lǐng)域。?

背景技術(shù)

我國是水產(chǎn)大國，魚類資源豐富，但加工和綜合利用還比較落后，大多以冷凍冷藏、罐頭食品及飼料魚粉等傳統(tǒng)加工為主，加工程度低，加工方式傳統(tǒng)，深加工生產(chǎn)高附加值的產(chǎn)品鮮有報(bào)道。蛋白質(zhì)水解后產(chǎn)生易于吸收、溶解性好、乳化性好，并具有多種生理活性的多肽，改善了蛋白質(zhì)的功能特性，提高了蛋白質(zhì)的營養(yǎng)及利用價(jià)值。蛋白來源不同，蛋白水解多肽的結(jié)構(gòu)和功能各有差異。已經(jīng)進(jìn)行研究的蛋白質(zhì)有酪蛋白、乳清蛋白、大豆蛋白、魚蛋白、玉米蛋白和雞蛋蛋白。魚蛋白營養(yǎng)豐富、原料充足，是進(jìn)行蛋白質(zhì)水解多肽制備的首選蛋白質(zhì)。目前國內(nèi)外已對包括泥鰍、狗鱈、沙丁魚、太平洋牙鱈、大西洋鮭魚等多種魚的蛋白質(zhì)的酶解特性進(jìn)行了研究。將魚蛋白水解，可以產(chǎn)生具有包括降血壓、抗菌、清除體內(nèi)自由基、抗氧化、降低膽固醇等多種生理活性的活性多肽。目前報(bào)道的包括魚類蛋白水解基本上都是直接添加成品堿性蛋白酶對蛋白質(zhì)進(jìn)行水解。成品堿性蛋白酶價(jià)格較昂貴，增加了生產(chǎn)成本。?

矛尾刺蝦虎魚(Acanthogobius?hasta)又名長身鯊，屬蝦虎魚科，?矛尾刺蝦虎魚種，為海水產(chǎn)大型蝦虎魚，分布于太平洋西北部、中國、日本和韓國。目前國內(nèi)外尚無利用安全菌株米曲霉Aspergillus?oryzae固態(tài)發(fā)酵制備魚蛋白水解多肽的研究，更沒有關(guān)于利用矛尾刺蝦虎魚固態(tài)發(fā)酵制備魚蛋白水解多肽的文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服目前魚蛋白水解多肽制備過程中的不足，提供一種新的工藝簡單、可操作性強(qiáng)的通過米曲霉Aspergillus?oryzae固態(tài)發(fā)酵的方式制備矛尾刺蝦虎魚蛋白水解抗氧化多肽的方法。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明是一種微生物固態(tài)發(fā)酵矛尾刺蝦虎魚肌肉蛋白制備抗氧化多肽的方法，其特點(diǎn)是，它采用固態(tài)發(fā)酵形式，其具體步驟如下：?

(1)矛尾刺蝦虎魚肌肉蛋白的制備：取新鮮矛尾刺蝦虎魚，除去魚鱗、魚皮、內(nèi)臟，清洗干凈，勻漿機(jī)勻漿，勻漿液80℃水浴保溫20min，使內(nèi)源酶失活；10℃，8000g離心20min，除去上層油脂后，置80℃烘干，得干燥肌肉蛋白；?

(2)制備發(fā)酵基質(zhì)：將干燥肌肉蛋白和直徑為1.0-1.5mm蛭石按照重量比60∶40混合攪拌混勻，用pH?7.5，0.2M的磷酸緩沖液調(diào)節(jié)含水率至55％，得發(fā)酵基質(zhì)，按V/V?50％將發(fā)酵基質(zhì)裝于三角瓶中115℃滅菌20min備用；?

(3)微生物固態(tài)發(fā)酵：將米曲霉Aspergillus?oryzae菌種在PDA斜面培養(yǎng)基上活化，從活化后的菌種斜面上挑取孢子接種至PDA液體培養(yǎng)基，30℃、120rpm培養(yǎng)至菌體濃度達(dá)到10⁷CFU/ml，得種子?液；按V/W?5％(發(fā)酵基質(zhì)干重計(jì)算)接種量將種子液接種于滅菌過的發(fā)酵基質(zhì)，30℃，發(fā)酵4d；?

(4)分離：發(fā)酵結(jié)束后，加蒸餾水浸泡、攪拌、過濾，濾清液即為抗氧化多肽，或者將濾清液濃縮干燥制粉，得抗氧化多肽粉。?

馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA)可以按以下方法配置：馬鈴薯200g(切片水煮30min，過濾取汁)、蔗糖20.0g、蒸餾水1000mL，pH值自然。固體培養(yǎng)基另加1.5～2g/100mL的瓊脂。?

米曲霉Aspergillus?oryzae為美國食品藥品監(jiān)督局FDA1989年公布了公認(rèn)為Generally?Recognized?as?Safe菌株，或GRAS菌株，是公認(rèn)的安全微生物菌種。本發(fā)明所述的可以選用購自中科院微生物所的米曲霉Aspergillus?oryzae(菌株號AS3.951)。?

以下是發(fā)明人所做的關(guān)于本發(fā)明方法的技術(shù)方案或參數(shù)的優(yōu)選試驗(yàn)及其結(jié)果。?

1、測定樣品的制備：發(fā)酵一定時(shí)間后，1g固態(tài)發(fā)酵基質(zhì)加入10ml蒸餾水，30℃，180rpm震蕩30min；4℃，20000g離心10min，上清液過0.22μm濾膜后用蒸餾水稀釋為10mg/mL的多肽液作為樣品進(jìn)行測定。?

2、接種量對蛋白酶和多肽的影響：?