[發明專利]抗菌肽NX-16及其制備方法與應用無效

申請號：	201110168592.4	申請日：	2011-06-22
公開（公告）號：	CN102260325A	公開（公告）日：	2011-11-30
發明（設計）人：	胡建和;杭柏林;王青;付登峰;許明錄;王蘭;尚田田;徐彥召;劉興友	申請（專利權）人：	河南科技學院
主分類號：	C07K7/08	分類號：	C07K7/08;C07K16/00;C12N15/11;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C12N15/70;C12P21/06;A61K38/10;A61P31/00
代理公司：	鄭州大通專利商標代理有限公司 41111	代理人：	樊羿
地址：	453003***	國省代碼：	河南;41
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摘要：
搜索關鍵詞：	抗菌 nx 16 及其制備方法應用
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及一種抗菌肽，具體涉及一種抗菌肽NX-16及其制備方法與應用。

背景技術

抗菌肽是生物體內經誘導產生的一種具有生物活性的小分子多肽，通常含有15-45個氨基酸殘基。這類活性多肽多數具有強堿性、熱穩定性以及廣譜抗菌等特點。世界上第一個抗菌肽是由瑞典科學家G.?Boman?等人于1980年從天蠶蛹中發現的。而后，人們相繼從細菌、真菌、兩棲類、昆蟲、高等植物、哺乳動物乃至人類中發現并分離獲得具有抗菌活性的多肽。最初，人們發現這類活性多肽對細菌具有廣譜高效殺菌活性。隨著人們研究工作的深入開展，發現某些抗細菌肽對部分真菌、原蟲、病毒、腫瘤細胞或癌細胞等均具有強有力的殺傷作用，某些抗菌肽還具有免疫調節功能。

抗生素的濫用不僅導致了藥物殘留等公共衛生問題，而且因耐藥菌株的出現，使得細菌性疾病的防治再次成為困擾人類的難題。同時國家有關法律規定，多種抗生素被禁用或限用。由于抗菌肽的廣譜的高效的抗菌活性及其獨特的抗菌機制而在新型抗菌藥物研究中已經顯露出明顯優勢。特別是對抗菌肽基因表達調控機制認識的不斷深化，結合現代基因工程技術，可設計出在醫藥工業和畜牧業上更有效的抗菌肽。因此，抗菌肽可作為抗生素的良好替代品在臨床上得到廣泛的使用將是大勢所趨。

目前，許多抗菌肽正在被開發成藥物，但是抗菌肽天然產量非常低，合成肽價格又相當昂貴，這些成為開發抗菌肽類藥物的一個瓶頸。基因工程表達技術可以高效表達生物活性蛋白，而且操作簡單、成本低。因此，通過基因工程技術生產抗菌肽具有廣闊的應用前景。通過對基因工程抗菌肽進行合理的改造和突變，進一步增加其抑菌和殺菌活性，研究其作用機制以及結構和功能的關系對畜牧業和抗生素替代藥物的生產實踐具有重要的指導意義。

目前，諸多研究者將抗菌肽基因表達方法多集中于真核表達系統。曾有報道稱采用大腸桿菌表達系統以融合蛋白的形式表達出抗菌肽，但結果不是十分理想。同時，有研究者提出這樣的問題，即大腸桿菌表達出的抗菌肽對大腸桿菌本身具有一定的殺滅作用，會影響到抗菌肽的表達。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供了一種具有抗菌活性的抗菌肽NX-16，構建了含有目的基因的重組表達載體，并公開了采用原核表達系統表達重組的抗菌肽基因，再通過酶解法獲得抗菌肽NX-16的制備方法，該方法表達效率高，分離純化簡單，易操作，穩定性好。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是：

一種抗菌肽NX-16，它是具有序列表中SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列的多肽，或是由SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列經環化、N末端和/或C末端的修飾、L－型氨基酸和D－型氨基酸互相轉變、序列末端缺失中的至少一種處理而得到的功能等同物的多肽。

一種多核苷酸，其核苷酸序列：

（a）編碼SEQ?ID?NO：1所示的多肽的多核苷酸；或為

（b）與多核苷酸（a）互補的多核苷酸。

一種含有上述核苷酸的載體。

一種含有上述載體的遺傳工程化的宿主細胞。

所述抗菌肽NX-16的制備方法包括如下步驟：

（1）將序列表中SEQ?ID?NO：1所示氨基酸序列按3個重復進行串聯，并根據大腸桿菌密碼子的偏愛性，設計該串聯氨基酸序列的串聯基因，分別在兩端再加入核酸限制性內切酶識別位點和保護性堿基，形成待表達的目的基因；